【摘 要】
:
目的:研究DAB2IP在调控肿瘤细胞葡萄糖代谢中的功能及相关机制。方法:(1)收集人乳腺癌组织切片及对应病人的18F-FDG PET/CT检查结果,应用免疫组化实验对石蜡切片中DAB2IP的表达情况进行检测,分析DAB2IP免疫组化评分与18F-FDG最大标准摄取值的相关性。(2)利用慢病毒系统,建立DAB2IP敲减、过表达乳腺癌细胞系及各自的阴性对照;通过裸鼠移植瘤模型,观察DAB2IP对肿瘤生
论文部分内容阅读
目的:研究DAB2IP在调控肿瘤细胞葡萄糖代谢中的功能及相关机制。方法:(1)收集人乳腺癌组织切片及对应病人的18F-FDG PET/CT检查结果,应用免疫组化实验对石蜡切片中DAB2IP的表达情况进行检测,分析DAB2IP免疫组化评分与18F-FDG最大标准摄取值的相关性。(2)利用慢病毒系统,建立DAB2IP敲减、过表达乳腺癌细胞系及各自的阴性对照;通过裸鼠移植瘤模型,观察DAB2IP对肿瘤生长的影响;使用micro-PET/CT成像检测各组移植瘤对18F-FDG的摄取能力;RT-q PCR及免疫组化实验分析移植瘤组织切片中DAB2IP表达改变对糖代谢相关蛋白的影响。(3)应用葡萄糖摄取实验、乳酸生成实验、ATP检测实验以及Seahorse XF糖酵解压力检测实验阐释DAB2IP在肿瘤细胞糖代谢中的作用;CCK8实验检测细胞增殖能力;RT-q PCR及Western blot实验分析DAB2IP表达改变对糖代谢相关蛋白的影响。(4)质谱分析寻找与DAB2IP结合的蛋白,免疫共沉淀实验证明DAB2IP与HIF-1α结合。RT-q PCR及Western blot实验检测DAB2IP表达水平对HIF-1αm RNA和蛋白水平的影响。Seahorse XF糖酵解压力检测实验、葡萄糖摄取实验、ATP检测实验验证HIF-1α在介导DAB2IP调控细胞糖代谢过程中的作用。(5)环己酰亚胺追踪实验、蛋白酶体抑制实验、泛素化实验阐释DAB2IP对HIF-1α的调控机制;蛋白质谱分析联合免疫共沉淀实验,确定介导DAB2IP促进HIF-1α泛素化降解的泛素连接酶;利用临近连接实验阐释DAB2IP对泛素连接酶与HIF-1α的调控作用。结果:(1)病例资料的分析表明,DAB2IP的免疫组化评分与乳腺癌SUVmax值呈负相关关系。(2)动物实验表明,DAB2IP敲减的乳腺癌细胞形成的移植瘤对18F-FDG的摄取增加,生长更快;移植瘤组织切片中GLUT1、PGK1的m RNA和蛋白表达水平升高。DAB2IP过表达的乳腺癌细胞形成的移植瘤对18F-FDG的摄取减少,生长变慢;移植瘤组织切片中GLUT1、PGK1的m RNA和蛋白表达水平下降。(3)细胞实验表明,乏氧条件下DAB2IP缺失不仅增强了细胞的糖摄取能力,上调了GLUT1、PGK1的表达水平;而且提高了细胞的糖酵解能力,增加了细胞内ATP的含量,促进了细胞增殖;而过表达DAB2IP则具有相反的调控作用。(4)乏氧条件下DAB2IP可以与HIF-1α结合,下调HIF-1α的蛋白水平;并且干扰HIF-1α可以逆转DAB2IP缺失对糖酵解、ATP含量及增殖的促进。(5)乏氧条件下,DAB2IP促进STUB1与HIF-1α结合从而加速HIF-1α的泛素化降解。结论:DAB2IP促进STUB1泛素化降解HIF-1α,抑制了乳腺癌细胞的葡萄糖摄取、糖酵解和增殖能力。
其他文献
事业单位是促进我国公益事业长效发展的重要组成部分,而绩效考核在事业单位人力资源管理部门开展各项工作时有着关键作用,更是保证事业单位稳定发展的必备手段。事业单位人力资源部门开展绩效考核工作,不仅是单位薪酬发放和奖惩制度的关键参考依据,更是带动员工主观能动性和提升工作效率的重要手段,还可以有效完善人力资源管理制度保证管理效率,以此促进事业单位在社会服务工作中充分体现自身的价值和作用,为事业单位的长效发
目的:制备Ca2+交联的海藻酸钠水凝胶(AH)三维支架,评价其内部超微结构、生物相容性、以及与脊髓神经干/祖细胞(NSPCs)联合在体移植对急性脊髓横断损伤的修复作用。方法:采用Ca2+与海藻酸钠交联制备AH三维支架;光镜和扫描电镜评估其微管道结构;MTSE44型万能试验机评估AH的力学性能;荧光显微镜和扫描电镜观察NSPCs与AH支架的体外共培养情况,免疫荧光染色检测NSPCs在体外的分化;评价
细胞异质性在恶性肿瘤中普遍存在,同时也是构成肿瘤化疗耐药,导致患者预后不良治疗的重要因素。为了研究肿瘤细胞的异质性,人们根据生物学行为特性来定义不同的肿瘤细胞亚群。细胞周期速率是肿瘤细胞的重要生物学性状,在肿瘤细胞群中,有一类肿瘤细胞处于G0/G1期,抗有丝分裂的药物对其效果不佳,因此被定义为慢周期肿瘤细胞(slow-cycling cancer cells,SCCCs)。SCCCs不仅存在于原发
现代贸易金融是由结构性贸易金融产品、自偿性授信安排、现金流管理和金融科技作为支撑,为参与全球价值链的企业所提供的一种综合性金融服务。本文通过梳理贸易金融的内涵、历史沿革、功能特点及其核心机理框架,结合当前中国经济背景,从汇率避险、金融普惠性、金融支持产业升级、控制信贷杠杆、降低不良资产率等五个角度,分析了贸易金融在这些方面发挥的重要作用,针对我国商业银行贸易金融发展过程中遇到的实践困境,提出相应的
目的:人胎盘间充质干细胞(human placental mesenchymal stem cells,PMSCs)已被证实可以保护肝缺血再灌注损伤(liver ischemia-reperfusion injury),但如何增强其保护作用仍需要深入探讨。我们通过在PMSCs中过表达Lin28蛋白探究Lin28蛋白是否可以调控PMSCs糖代谢过程,通过门静脉注射过表达Lin28蛋白的PMSCs细胞
【目的】半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)包含caspase-1、caspase-4和caspase-11等,各种原因导致细胞内炎症小体活化,活化后的caspase剪切Gasdermin-D蛋白(GSDMD)的C端和N端结构域的连接区,释放N端(GSDMD-N),该结构域可以结合膜磷脂并在膜上打孔破坏细胞膜,分泌
目的:草酸钙肾结石能够诱发肾脏炎症反应和损伤,从而进一步促进肾结石的形成和发展,损害肾脏功能,但其中潜在的分子机制目前仍未阐明。我们通过研究SIRT1调控草酸钙结晶引起的代谢异常及炎症损伤来揭示其在肾结石发生发展中的作用。方法:首先通过腹腔注射构建了肾草酸钙结晶造模组(Gly)与SIRT1过表达组(Gly+SRT1720)小鼠模型,收集小鼠肾脏行GC-MS非靶向代谢组检测差异代谢物。然后分析了原代
目的:骨关节炎(OA)是一种由机械负荷、炎症和代谢因素共同作用的复杂病理过程的常见病。已经发现软骨细胞铁死亡有助于骨关节炎的进展。由于铁沉积是铁死亡的主要病理事件,铁螯合剂去铁胺(DFO)在各种退行性疾病模型中被用作铁死亡的抑制剂。然而,目前对其治疗OA的疗效了解甚少。我们的研究目的是探究DFO是否对软骨细胞铁死亡有改善作用以及对骨关节炎发展的影响,并进一步探讨其可能的机制。方法:采用IL-1β模
目的:脓毒症是机体感染所导致的宿主反应失调,严重时可导致全身生命器官的功能和结构损伤。ICU获得性萎弱(ICU-AW)是指在重症期间发生的、以四肢骨骼肌乏力为主要表现的综合征。脓毒症是导致ICU-AW的主要诱因,多数患者出现骨骼肌肌力下降和肌萎缩。已有研究表明细胞焦亡在脓毒症肌萎缩中明显激活,然而其如何发挥作用尚不清楚。本研究旨在探索细胞焦亡在脓毒症肌萎缩发生和发展中的作用机制。方法:采用盲肠结扎
目的:研究薯蓣皂苷在白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞炎症及手术建立的大鼠骨性关节炎模型中的保护作用,并探究此过程中薯蓣皂苷发挥作用的潜在分子机制。方法:体外实验中,本研究使用IL-1β诱导大鼠软骨细胞的炎症,并使用不同浓度的薯蓣皂苷对其进行干预,通过CCK-8实验探究不同浓度薯蓣皂苷对细胞活性的影响。同时,通过Western-blot实验、荧光定量PCR实验以