【摘 要】
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目的:研究DAB2IP在调控肿瘤细胞葡萄糖代谢中的功能及相关机制。方法:（1）收集人乳腺癌组织切片及对应病人的18F-FDG PET/CT检查结果,应用免疫组化实验对石蜡切片中DAB2IP的表达情况进行检测,分析DAB2IP免疫组化评分与18F-FDG最大标准摄取值的相关性。（2）利用慢病毒系统,建立DAB2IP敲减、过表达乳腺癌细胞系及各自的阴性对照;通过裸鼠移植瘤模型,观察DAB2IP对肿瘤生
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目的:研究DAB2IP在调控肿瘤细胞葡萄糖代谢中的功能及相关机制。方法:（1）收集人乳腺癌组织切片及对应病人的18F-FDG PET/CT检查结果,应用免疫组化实验对石蜡切片中DAB2IP的表达情况进行检测,分析DAB2IP免疫组化评分与18F-FDG最大标准摄取值的相关性。（2）利用慢病毒系统,建立DAB2IP敲减、过表达乳腺癌细胞系及各自的阴性对照;通过裸鼠移植瘤模型,观察DAB2IP对肿瘤生长的影响;使用micro-PET/CT成像检测各组移植瘤对18F-FDG的摄取能力;RT-q PCR及免疫组化实验分析移植瘤组织切片中DAB2IP表达改变对糖代谢相关蛋白的影响。（3）应用葡萄糖摄取实验、乳酸生成实验、ATP检测实验以及Seahorse XF糖酵解压力检测实验阐释DAB2IP在肿瘤细胞糖代谢中的作用;CCK8实验检测细胞增殖能力;RT-q PCR及Western blot实验分析DAB2IP表达改变对糖代谢相关蛋白的影响。（4）质谱分析寻找与DAB2IP结合的蛋白,免疫共沉淀实验证明DAB2IP与HIF-1α结合。RT-q PCR及Western blot实验检测DAB2IP表达水平对HIF-1αm RNA和蛋白水平的影响。Seahorse XF糖酵解压力检测实验、葡萄糖摄取实验、ATP检测实验验证HIF-1α在介导DAB2IP调控细胞糖代谢过程中的作用。（5）环己酰亚胺追踪实验、蛋白酶体抑制实验、泛素化实验阐释DAB2IP对HIF-1α的调控机制;蛋白质谱分析联合免疫共沉淀实验,确定介导DAB2IP促进HIF-1α泛素化降解的泛素连接酶;利用临近连接实验阐释DAB2IP对泛素连接酶与HIF-1α的调控作用。结果:（1）病例资料的分析表明,DAB2IP的免疫组化评分与乳腺癌SUVmax值呈负相关关系。（2）动物实验表明,DAB2IP敲减的乳腺癌细胞形成的移植瘤对18F-FDG的摄取增加,生长更快;移植瘤组织切片中GLUT1、PGK1的m RNA和蛋白表达水平升高。DAB2IP过表达的乳腺癌细胞形成的移植瘤对18F-FDG的摄取减少,生长变慢;移植瘤组织切片中GLUT1、PGK1的m RNA和蛋白表达水平下降。（3）细胞实验表明,乏氧条件下DAB2IP缺失不仅增强了细胞的糖摄取能力,上调了GLUT1、PGK1的表达水平;而且提高了细胞的糖酵解能力,增加了细胞内ATP的含量,促进了细胞增殖;而过表达DAB2IP则具有相反的调控作用。（4）乏氧条件下DAB2IP可以与HIF-1α结合,下调HIF-1α的蛋白水平;并且干扰HIF-1α可以逆转DAB2IP缺失对糖酵解、ATP含量及增殖的促进。（5）乏氧条件下,DAB2IP促进STUB1与HIF-1α结合从而加速HIF-1α的泛素化降解。结论:DAB2IP促进STUB1泛素化降解HIF-1α,抑制了乳腺癌细胞的葡萄糖摄取、糖酵解和增殖能力。
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