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[目的]了解深圳市人民医院三种常见医院感染菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌)的耐药现状；研究该院过去一年中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及对常用抗生素的耐药情况；通过脉冲场凝胶电泳与基因同源性分型分析，探讨大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌医院感染情况及进行病原溯源研究，为临床合理应用抗生素治疗大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌引发的感染及其流行病学提供实验依据和指导。
[方法]1.根据病历记录与医院感染监测系统资料，收集从2004年9月到2005年5月期间深圳市人民医院三种常见医院感染菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌)标本并进行分离、鉴定。
2.深圳市人民医院三种常见医院感染菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌)药物敏感性测定：
①通过ESBLs初筛、确证试验分析大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产ESBLs水平，了解其检出率；
②应用K-B法，测定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及粪肠球菌临床分离株对常用抗生素的耐药性；
③对大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌临床分离株以产ESBLs与非产ESBLs菌株进行分类，并分析其对20种抗生素的耐药差异。
3.利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术建立以上三种常见医院感染菌电泳图谱库。
4.利用凝胶成像系统和FingerprintingⅡ软件对以上三种常见医院感染菌的PFGE电泳图谱进行聚类分析，并进行基因同源性分析。
[结果]1.经过VITEKAMS60全自动微生物分析系统的鉴定，39株肺炎克雷伯菌、42株大肠埃希菌、35株粪肠球菌的鉴定结果与医院感染监测系统资料及微生物室以往鉴定记录相一致。
2.通过ESBLs初筛和确证试验，39株肺炎克雷伯菌、42株大肠埃希菌ESBLs阳性株分别为17株、19株，检出率分别为43.6％(17/39)、45.2％(19/42)。
3.39株肺炎克雷伯菌对20种抗生素的药敏结果显示：肺炎克雷伯菌对抗生素耐药性较高的前5种抗生素依次为氨苄西林(AMP)、哌拉西林(PIP)、氨苄西林/舒巴坦(SAM)、头孢呋辛(CXM)和复方新诺明(SXT)，多重耐药菌占实验菌株的41.0％；敏感性较高的前5种抗生素依次为亚胺培南(IPM)、美洛培南(MEM)、头孢吡肟(FEP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)和阿米卡星(AMK)。
4.42株大肠埃希菌对20种抗生素药敏结果显示，大肠埃希菌对抗生素耐药性较高的前5种抗生素依次为哌拉西林(PIP)、复方新诺明(SXT)、庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)和头孢克洛(CEC)，多重耐药菌占实验菌株的45.2％；敏感性较高的5种抗生素依次为亚胺培南(IPM)、美洛培南(MEM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢唑肟(CZX)和阿米卡星(AMK)。
5.肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌ESBLs阳性株对绝大多数抗生素的耐药程度均高于非产ESBLs株，且多呈多重耐药或交叉耐药。
6.本次实验未见有亚胺培南(IPM)和美洛培南(MEM)耐药肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌菌株。
7.以XbaⅠ对肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌染色体DNA进行酶切后电泳图谱分别可显示8～22条、4～22条DNA条带，其分子量大小在30kb-700kb之间。以SmaⅠ酶对35株粪肠球菌染色体DNA进行酶切，经研究发现，粪肠球菌染色体DNA电泳图谱可显示4～16条DNA条带，片段范围约在40kb-750kb之间。
8.经FingerprintingⅡ软件分析，可大致将39株肺炎克雷伯菌、42株大肠埃希菌、35株粪肠球菌分别分为3群、2群、2群，其中每一群又可细分为不同数目的亚群，型、亚型。
9.35株粪肠球菌对9种抗生素药敏试验显示，最为敏感的抗生素为替考拉宁(TEC)，其次为氨苄西林(AMP)、万古霉素(VAN)，其敏感率分别为97.8％、94.7％、78.9％；较为敏感的抗生素为氯霉素(CHL)、高单位的庆大霉素(GEN)，其敏感率分别为72.4％、67.7％；耐药率最高的为利福平(RIF)，其次为红霉素(ERY)、四环素(TCY)，其耐药率分别为60.5％、47.4％、46.1％。本次试验未见有耐万古霉素粪肠球菌，耐药率较低的其次为替考拉宁(TEC)、氨苄西林(AMP)，耐药率分别为2.2％、5.3％。
[结论](1)深圳市人民医院肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌耐药现象严重，产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检出率高。
(2)产ESBLs肺炎克雷伯菌携带多个耐药基因的现象较为普遍，常表现为多重耐药或交叉耐药。
(3)通过PFGE基因分型，发现不存在单独的ESBLs基因群，耐药表型与基因分型可表现一致，也可表现不一致。
(4)医务工作者应加强ESBLs阳性菌株的检测，应尽量减少或避免第三代头孢菌素的使用。
(5)医务工作者应加强合理使用抗生素的观念，对耐万古霉素粪肠球菌应高度重视，及时发现并控制其引发的医院感染和暴发流行。
(6)本次实验并不能证实存在肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及粪肠球菌的院内暴发性流行性感染，但不能排除存在由不同亚型菌株所引起的散在流行。