兔同种异体骨异位再血管化的实验研究

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1 背景在机械、工业、交通日渐发达的今天,各种高能量损伤越来越多,程度越来越复杂。小腿开放性粉碎骨折发生率最高,术后骨感染率较高,且易转化为慢性骨感梨[1]。彻底去除感染骨段及其周围病灶是控制感染的重要手段,但可能造成骨缺损甚至大段骨缺损,且控制局部创面感染往往还需经过漫长的治疗过程。创伤后感染性大段骨缺损是骨科难题,同种异体骨用于感染性大段骨缺损的修复尚未见报道,能否将其用于感染性大段骨缺损的治疗?我们设想将同种异体骨段置于体内血供丰富的部位,使其完成再血管化,待创面感染彻底控制后,再将其带血管蒂的血管化同种异体骨段移植修复骨缺损。2 目的以中国白兔为实验对象,将制备好的同种异体骨段置于兔血运丰富的隐动脉处,探索其完成再血管化的时间。3 方法3.1同种异体骨的制备选取10只中国白兔,空气栓塞耳缘静脉杀死白兔,按照无菌手术的方法取出兔胫骨,把周围的肌肉及骨膜剔除,截成1.5cm长度的骨段,把骨髓组织用小刮匙彻底刮除,用无菌生理盐水清洗干净,浸泡于10%的庆大霉素中30分钟,用灭菌好的双层血浆袋密封包装,经过辐照灭菌后,放入冰箱4。冷藏12h,-30°冷冻12h,在-80。的深低温冰箱3周后使用,可以去除更多的抗原。3.2同种异体骨再血管化以健康成年中国白兔为研究对象。把60只白兔按随机数字表法随机分为两组,其中实验组和对照组各30只。实验组把已经准备好的长1.5cm的异体骨段放置在兔大腿股直肌和股内侧间隙隐动脉处,用1.Omm.克氏针把骨段固定在股骨内侧,对照组为自体的胫骨段,长度和实验方法与实验组相同,术后4周,8周,12周分别从肉眼大体标本观察、免疫组化切片检测血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮细胞中CD34蛋白表达,行统计学处理。4结果实验组和对照组部分兔手术部位感染,不包括在统计标准内,补充空缺。VEGF以新生的、未成熟的血管周围,软骨细胞、成骨细胞以及未分化的间叶细胞周围最多,术后4、12周,VEGF的表达量实验组和对照组比较无差异,8周,与对照组相比,实验组VEGF的表达有显著统计学差异,两组纵向比较,8周多于4、12周。CD34蛋白以哈弗管周围的血管内皮细胞中最明显。术后4周,CD34阳性血管两组比较有显著差异,8、12周,实验组与对照组比较,无显著差异。实验组和对照组CD34阳性血管8周多于4、12周。术后4周,实验组和对照组都有较少的纤维组织膜包裹骨段、填充髓腔,与骨段结合松散,容易剥离,骨表面无明显吸收陷窝,出现光泽。术后8周,两组骨段上的纤维组织膜变厚,与骨段结合紧密,不易分开,骨段表面不平整,有吸收陷窝,出现光泽。术后12周两组骨段上包裹的纤维组织膜更厚,与骨段结合更紧密,骨表面的吸收陷窝更多,光泽更明显。5结论兔大段同种异体胫骨段在血运丰富的隐动脉处8周能够实现再血管化,时间与自体骨段无明显差异。
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