【摘 要】
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‘红颜’草莓外观品质好,营养物质丰富,富含黄酮等多种生物活性物质,抗氧化能力强,是山西省晋中市太谷区设施大棚草莓的主栽品种之一。常规繁殖方式易积累病毒,导致果实产量降低和品质下降。利用茎尖组织培养技术,能在较短时间内提供大量整齐的种苗。但仍存在培养时间长、步骤多、易污染等问题。本研究以当年生‘红颜’草莓为试验材料,通过探究茎尖不同大小、匍匐茎采集时间、外植体不同灭菌时间、培养基不同激素浓度配比、转
【基金项目】
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山西省重点研发计划重点项目（No.201803D221014-2）；
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‘红颜’草莓外观品质好,营养物质丰富,富含黄酮等多种生物活性物质,抗氧化能力强,是山西省晋中市太谷区设施大棚草莓的主栽品种之一。常规繁殖方式易积累病毒,导致果实产量降低和品质下降。利用茎尖组织培养技术,能在较短时间内提供大量整齐的种苗。但仍存在培养时间长、步骤多、易污染等问题。本研究以当年生‘红颜’草莓为试验材料,通过探究茎尖不同大小、匍匐茎采集时间、外植体不同灭菌时间、培养基不同激素浓度配比、转接次数对‘红颜’草莓茎尖再生的影响,优化‘红颜’草莓组培一步成苗体系;同时对其类黄酮合成途径的关键酶PAL基因（Unigene15686）进行筛选、克隆和分析,并构建PAL基因过表达载体和沉默载体。本文结论如下:1、草莓茎尖的最佳灭菌处理为0.1%升汞处理10 min,成活率可达83.33%;最佳茎尖大小为0.3 cm,成活率可达93.33%。2、一步成苗最佳培养基为MS+0.37 mg/L 6-BA+0.15 mg/L IBA+0.04 mg/L GA,最佳再生频率为4.13,培养周期为50 d。培养30 d后进行转接,最佳转接次数为1次,再生频率可达1.40。组培苗的最佳栽培基质为:V（园土）:V（营养土）:V（蛭石）=1:1:1,移栽成活率可达91.67%。3、克隆得到‘红颜’草莓PAL基因unigene15686,ORF长度为2175 bp,编码725个氨基酸,与6号染色体上maker-Fvb6-1-augustus-gene-255.38基因的ORF序列相同,推测为同一基因。该蛋白整体保守性较高,具有典型的PAL保守结构域;系统分析草莓PAL基因发现,草莓26个PAL基因主要存在两个进化枝,其编码的所有蛋白均呈酸性,大部分存在于溶酶体和叶绿体中。4、采用同源重组方式,构建了以p CAMBIA1300为骨架的PAL基因（Unigene15686）的过表达载体p CAMBIA1300GFP-PAL15686;筛选PAL基因的靶标片段,将其重组至p TRV2载体,构建了PAL的基因沉默载体p TRV2-PAL15686。以上结果将对草莓种苗的工厂化生产和草莓关键酶PAL的深入研究提供理论基础。
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