【摘 要】
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目的:明确蚕梅方对肠道腺瘤小鼠肠道腺瘤的疗效;探究其调控相关炎症因子及Keap1/NRF2/NQO1信号通路的分子生物学机制;研究CMF干预前后对肠道菌群的调节作用;粪菌移植探讨肠道菌群对肠道腺瘤小鼠的影响,为临床应用中药复方蚕梅方防治肠道腺瘤提供理论基础和实验依据。方法:1.肠道腺瘤模型小鼠构建,药物干预与检测构建化学致癌剂联合高脂饮食（AOM/DSS+HFD）诱导的肠道腺瘤小鼠模型,具体而言,
【基金项目】
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“岳阳医院院级基金”化痰散积法通过肠道菌群调控p62/keap1/Nrf2通路抗肠腺瘤癌变的机制研究（2019YYZ08）；
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目的:明确蚕梅方对肠道腺瘤小鼠肠道腺瘤的疗效;探究其调控相关炎症因子及Keap1/NRF2/NQO1信号通路的分子生物学机制;研究CMF干预前后对肠道菌群的调节作用;粪菌移植探讨肠道菌群对肠道腺瘤小鼠的影响,为临床应用中药复方蚕梅方防治肠道腺瘤提供理论基础和实验依据。方法:1.肠道腺瘤模型小鼠构建,药物干预与检测构建化学致癌剂联合高脂饮食（AOM/DSS+HFD）诱导的肠道腺瘤小鼠模型,具体而言,于实验开始腹腔注射AOM试剂,定期给予2.5%DSS饮水及高脂饮食饲养;模型小鼠随机分组,灌胃给予蚕梅方水煎醇沉提取物,蚕梅方水煎粗体提取物及柳氮磺胺嘧啶,连续给药至第20周。定期记录小鼠体重,观察小鼠一般形态学及疾病情况改变;观察肠腺瘤生成情况,结肠长度,结肠病理组织学变化;Elisa检测结肠组织NF-κB,血清IL-17C表达情况;RT-PCR检测IL-17C和NF-κB m RNA水平;Western Blot检测肠组织Keap1、NRF2、NQO1蛋白的表达,探讨蚕梅方干预炎症性肠道腺瘤的分子生物学机制。2.蚕梅方对肠道腺瘤小鼠肠道菌群的调节作用通过16SDNA高通量测序技术对小鼠肠道菌群进行定量定性检测,检测治疗前后肠道菌群的菌群多样性,丰度变化以及差异菌群的定量分析。3.粪菌移植（FMT）实验动物分组与粪菌干预构建肠道腺瘤小鼠模型小鼠,随机分为:ADH组、CMFA-ADH组、Control-ADH组;正常小鼠随机分为:control组、ADH-control组;所有受体小鼠均采用抗生素干预模拟无菌小鼠,灌胃给予对应的粪菌混悬液4周。观察小鼠的一般情况与体重变化,观察肠腺瘤生成情况,结肠宏观表型及结肠病理组织学变化,FITC-D检测肠道上皮渗透性改变。结果:1.蚕梅方对肠道腺瘤小鼠的疗效结果显示,Control组小鼠体重稳定增长,ADH组（P＜0.05）体重减轻;与ADH组相比,中药及柳氮磺胺嘧啶对小鼠体重无影响;Control组肠道未见炎症反应及肠道腺瘤生成,ADH组（P＜0.01）结肠腺瘤生成最多,CMF-A（P＜0.05）组腺瘤数目最少;肠道腺瘤大小结果示,与药物组相比,ADH组在小肠与结肠部位的肠腺瘤较大。ADH组结肠明显短于Control组（P＜0.01）,CMF-A组结肠明显长于ADH组（P＜0.05）,CMF-M组结肠明显长于ADH组（P＜0.01）。结肠病理示ADH组肠组织腺体密集,腺上皮细胞异型增生明显,细胞核明显增大,见病理性核分裂及间质炎细胞浸润。2.蚕梅方对相关炎症因子及Keap1/NRF2/NQO1信号通路的调控作用与ADH组相比,CMF-A（P＜0.01）组与CMF-M（P＜0.05）均下调结肠组织NF-κB蛋白表达,CMF-A组（P＜0.05）与CMF-M均下调血清IL-17C表达,CMF-M组NF-κB m RNA表达下调,IL-17C m RNA表达水平在CMF-A组与CMF-M均下调。与Control组相比,Keap1蛋白在ADH组与CMF-A组表达减少;Control组中NRF2和NQO1蛋白表达水平较低,ADH组表达明显上调,CMF-A下调了NRF2和NQO1蛋白表达。3.蚕梅方对肠道腺瘤小鼠肠道菌群的调节作用16SDNA高通量测序检测肠道菌群结果显示,ADH组菌群多样性减少,物种丰度增加。在门、纲、目水平分析丰度最高的前3种菌群,每组结果一致;在科、属水平分析,每组丰度最高的前3种菌群明显不同。门、科、属水平组间差异物种检测显示,Control组与ADH组间存在多个具有统计学差异的物种,经CMF治疗干预后,门水平Actinobacteria（P＜0.01）,科水平Bifidobacteriaceae（P＜0.05）以及属水平Erysipelatoclostridium（P＜0.01）和Bifidobacterium（P＜0.05）细菌丰度显著增加。相反的,属水平CandidatusSaccharimonas（P＜0.01）和Erysipelatoclostridium（P＜0.01）细菌丰度在蚕梅方干预后明显降低。4.FMT对小鼠一般状况的影响ADH-Control组小鼠较Control组相比体重减轻,ADH组,Control-ADH和CMFA-ADH体重变化趋势一直。＞3mm腺瘤生成情况统计显示,与ADH组比较,Control-ADH和CMFA-ADH肠道腺瘤数量明显减少。FITC-Dextran结果显示,与ADH组相比,Control-ADH（P＜0.05）和CMFA-ADH（P＜0.05）对肠通透性均有明显改善。结论:1.蚕梅方对AOM/DSS+HFD诱导的肠道腺瘤小鼠具有良好防治效果;其机制与降低炎症因子NF-κB及IL-17C表达及调控Keap1/NRF2/NQO1信号通路有关。2.蚕梅方能够调节肠道菌群结构及特定菌群丰度,逆转肠道菌群紊乱;3.FMT缓解肠道通透性,推测蚕梅方通过调控肠道菌群间接发挥防治肠道腺瘤癌变的作用。
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