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目的观察女贞子酚苷富集物（PGE）对去卵巢（OVX）小鼠模型骨代谢的影响,探讨其改善尿钙重吸收的作用机制,并筛选出PGE中提高尿钙重吸收的有效酚苷单体。方法:1、女贞子酚苷富集物对去卵巢小鼠钙代谢的影响:采用SPF级雌性C57小鼠建立骨质疏松的去卵巢模型小鼠,40只随机均分为5组,即正常（Sham）组、去卵巢（OVX）组、女贞子低剂量（FL）组、女贞子中剂量（FM）组、女贞子高剂量（FH）组,连续灌胃10周。在实验期每隔两周称量体重,Micro CT扫描分析离体胫骨骨密度;血钙、尿钙和尿肌酐（Cr）含量采用比色法;ELISA检测血清中PTH、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽（PINP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP-5b）;分别应用H＆E、TRAP染色分析股骨组织形态和破骨细胞数目。将小鼠肾皮质和肾髓质进行分离并冻存,采用蛋白质印迹法（WB）分别检测两个部位TRPV5、TRPV6、PMCA-1b、NCX1蛋白表达,获得初步结果后,继续检测PTH1R、PKA和p-PKA蛋白表达水平。2、女贞子酚苷富集物的含药血清对小鼠肾小管上皮细胞钙摄取的影响:体外制备正常血清和PGE含药血清,选用2-3周雄性C57小鼠取原代肾小管上皮细胞（TEC）,将形态稳定良好的TEC随机分以下组别:正常组（Con）、女贞子低、高剂量含药血清组（WFL和WFH）以及女贞子低剂量、高剂量含药血清+PKA抑制剂H89组（WFL+H89和WFH+H89）,处理24小时后,采用Fluo-3 AM检测细胞内钙离子浓度,检测PTH1R、PKA、p-PKA和TRPV5蛋白表达水平,ELISA法检测细胞内c AMP含量。3、女贞子酚苷单体对小鼠肾小管上皮细胞钙摄取的影响:将形态稳定良好的TEC随机分为Con组、酚苷单体低高两个剂量组(其中酚苷单体包括红景天苷Sal、橄榄苦苷Ole、女贞苷Lig、特女贞苷Spe,两个剂量分别为10-8M、10-6M),配合酚苷单体低高两个剂量+H89组,采用Fluo-3 AM检测细胞内钙离子浓度,以上细胞在处理24小时后,筛选出酚苷单体后,WB检测所有组PTH1R、PKA、p-PKA和TRPV5蛋白表达水平以及ELISA法检测细胞内c AMP含量。4、红景天苷和橄榄苦苷对高钙饮食小鼠的尿钙重吸收的影响:SPF级雌性C57小鼠56只随机均分为7组,建立高钙饮食模型小鼠,即Con组、Mod组、PL（225 mg/kg）组、PH（675 mg/kg）组、Sal（10 mg/kg）组、Ole（10mg/kg）组和阳性药骨化三醇（Cal,0.1μg/kg）组,连续灌胃3周。实验期间每周称量体重,并收集小鼠尿液。3周后,开始小鼠取材,比色法测定血清Ca、尿液Ca和尿Cr的含量。结果1、PGE可以改善OVX小鼠胫骨三维结构、提高股骨松质骨骨小梁密度,同时对子宫无明显刺激作用;与OVX组相比,PGE可以明显抑制小鼠体重升高（P＜0.01或P＜0.001）,而且明显抑制血清中骨吸收标记物TRAP-5b水平（P＜0.01）,对骨形成标记物PINP有促进的趋势;各组间血钙稳定,中、高剂量组PGE对尿钙有明显抑制作用（P＜0.05）,对PTH含量有明显抑制作用（P＜0.05）。在肾皮质中,与OVX相比,FM、FH组小鼠TRPV5表达显著升高（P＜0.01或P＜0.001）,在FH组NCX1表达显著升高（P＜0.05）,而对PMCA-1b和TRPV6无明显作用;在肾髓质中,与OVX相比,FH组小鼠TRPV6表达显著升高（P＜0.001）,而对PMCA-1b、NCX1和TRPV5无明显作用;进一步机制探究,我们发现FH组对PTH1R、p-PKA蛋白表达均有促进作用（P＜0.01）。2、Fluo-3 AM荧光探针染色后发现,与Con组比,WFL、WFH组胞内荧光增强（P＜0.001）,而加入了H89后,分别与对应WFL、WFH组相比,细胞荧光强度明显降低（P＜0.001）;与Con组相比,WFL组中PTH1R、p-PKA和TRPV5蛋白表达显著增高,WFH组中PTH1R和p-PKA蛋白表达显著增高（P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001）,而加入了H89后,分别与对应WFL组、WFH组相比,细胞内p-PKA和TRPV5含量明显下降（P＜0.05或P＜0.01）;与Con组相比,WFL组和WFH组细胞内c AMP含量显著上升（P＜0.01或P＜0.001）,而加入H89后,分别与对应WFL组和WFH组相比,细胞内c AMP含量明显下降（P＜0.05或P＜0.001）。3、经过Fluo-3 AM对酚苷单体的筛选荧光探针染色后,我们发现Sal和Ole对肾小管钙吸收作用明显（P＜0.001）;与Con组相比,Sal组和Ole组中PTH1R、p-PKA和TRPV5蛋白表达显著增高（P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001）,而加入了H89后,与对应Sal组和Ole组相比,细胞内p-PKA含量明显下降（P＜0.001）;而加入H89后,Sal和Ole 10-6M两组中TRPV5蛋白有下降趋势,Sal和Ole 10-8M两组中,TRPV5蛋白表达显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。其中又以Sal 10-6M和Ole 10-8M效果更明显。与Con组相比,Sal 10-6M组和Ole 10-8M组细胞内c AMP含量显著上升（P＜0.01或P＜0.001）,而加入了H89后,与对应Sal 10-6M组和Ole 10-8M组相比,细胞内c AMP含量明显下降（P＜0.01）。4、我们发现各组小鼠血钙无明显变化。高钙饮食可以明显增加尿钙排泄,同时从第2周起,与Mod组相比,开始5个药物组同对尿钙排泄均有一定抑制效果,异有统计学意义。结论1.女贞子酚苷富集物可有效防治去卵巢引起的小鼠骨质疏松。2.女贞子酚苷富集物能够有效抑制OVX小鼠高尿钙排泄。3.女贞子酚苷富集物通过激活肾小管PTH1R/PKA/TRPV5通路提高肾小管对钙的重吸收。4.女贞子酚苷富集物中提高尿钙重吸收的有效物质可能为橄榄苦苷和红景天苷。