【摘 要】
:
背景阿洛西林和哌拉西林都是半合成脲基青霉素,因抗菌谱广泛、抗菌活性高、不良反应发生率低,常被作为治疗儿童严重感染和败血症的一线药物。在常规给药方案下,儿童体内血药浓度差异大,导致患者疗效不佳和/或发生肾毒性,然而,此现象的产生机制至今尚未阐明。阿洛西林和哌拉西林给药后多以原形药物经肾脏消除,肾脏中分布着有机阴离子转运体1(OAT1)、有机阴离子转运体3(OAT3)等多种转运体,广泛参与药物间相互作
【基金项目】
:
国家自然科学基金(81703603,82173897);
论文部分内容阅读
背景阿洛西林和哌拉西林都是半合成脲基青霉素,因抗菌谱广泛、抗菌活性高、不良反应发生率低,常被作为治疗儿童严重感染和败血症的一线药物。在常规给药方案下,儿童体内血药浓度差异大,导致患者疗效不佳和/或发生肾毒性,然而,此现象的产生机制至今尚未阐明。阿洛西林和哌拉西林给药后多以原形药物经肾脏消除,肾脏中分布着有机阴离子转运体1(OAT1)、有机阴离子转运体3(OAT3)等多种转运体,广泛参与药物间相互作用。然而,很少有研究探索肾脏转运体对阿洛西林和哌拉西林的转运以及转运体基因多态性对儿童临床药代动力学的影响。因此,本研究拟构建高表达转运体的细胞模型,筛选出关键转运体进一步明确其对阿洛西林和哌拉西林儿童临床药代动力学的影响。方法选用电穿孔转染法构建高表达转运体的细胞模型,通过优化电参数获得较高的转染效率和稳定的转染效果;使用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)建立和验证细胞内阿洛西林和哌拉西林浓度的检测方法;利用构建的细胞电转染模型研究阿洛西林和哌拉西林的摄取,筛选出关键转运体;给予大鼠转运体抑制剂,探究关键转运体对阿洛西林和哌拉西林的体内过程的影响;采用机会采血法获得阿洛西林和哌拉西林的儿童临床样本,使用高效液相色谱仪结合紫外检测器(HPLC-UV)测定血药浓度,使用非线性混合动力学模型(NONMEM)模型计算药动学参数,使用亚洲人群基因分型(ASA)芯片检测患者的基因型,借助全基因组关联分析(GWAS)明确显著影响药物代谢的基因位点。结果优化后的电穿孔转染条件为:HEK293细胞密度5×106/mL、电压240 V、电容500 μF、电阻∞、电击杯电极间隙4 mm、质粒浓度24 μg/mL;建立了细胞内药物浓度的LC-MS/MS检测方法,在0.0005-0.2 nmol/mL的检测范围内,选择性、基质效应、线性等9个方面的考察结果均符合要求;HEK293-OAT3细胞对浓度为5 μM的阿洛西林和浓度为250 μM的哌拉西林的摄取均显著高于HEK293-NC细胞(p<0.0001),细胞内浓度分别约为后者的6倍和4倍,分别求得阿洛西林和哌拉西林在HEK293-OAT3中的米氏常数(Km)为 31.30μM 和 95.46 μM;与 HEK293-NC 细胞比较,HEK293-OAT1 细胞仅对浓度为250μM的哌拉西林有摄取作用(p<0.05),但摄取量较小,仅为对照组的1.5倍。灌胃给予Wistar大鼠500 mg/kg丙磺舒后,阿洛西林的清除率(CL)由0.022±0.005 L/min/kg 显著降低至 0.007±0.004 L/min/kg(p<0.001),哌拉西林的的 CL 由 0.006±0.002 L/min/kg显著降低至0.002±0 L/min/kg(p<0.001);研究共纳入使用阿洛西林的儿童患者102例,临床样本102个,GWAS结果表明OAT3相关的单核苷酸多态性(SNP)位点与CL均无显著相关性;研究共纳入使用哌拉西林的儿童患者52例,临床样本52个,GWAS结果提示rs10792368位点基因型可能与CL密切相关。结论本研究成功构建了 OAT1/3质粒和高表达OAT1/3等多个转运体的细胞电转染模型,并筛选出了介导阿洛西林和哌拉西林在肾脏摄取的关键转运体OAT3。抑制OAT3的功能,阿洛西林和哌拉西林在大鼠体内的CL显著降低,血药浓度和药-时曲线下面积(AUC)显著增大,半衰期(t1/2)和平均滞留时间(MRT)延长。研究表明,OAT3相关的SNP与儿童体内的药动学过程相关,其中rs10792368位点的基因型显著影响哌拉西林的CL,基因型为AA、AC、CC的儿童对哌拉西林的清除依次加快。
其他文献
多环特特拉姆酸大环内酰胺(polycyclic tetramate macrolactam,PoTeM)是一类含有稠环体系的大环内酰胺类化合物,具有复杂的化学结构和多样的生理活性,逐渐组成了一类新的抗生素家族。生物信息学分析显示数据库中含有大量未知的PoTeMs基因簇,基于基因序列的新PoTeMs定向发现和组合生物合成研究将拓展PoTeMs的化学多样性。溶杆菌(Lysobacter)是γ-变形菌纲
<正> 张某某,男,56岁,1988年5月就诊。每餐进食后即满头隐隐作痛已旬余,约半个时晨自行缓解,而其他时间无头痛之苦,饮食、两便如常,苔白舌质淡白,脉缓。据东垣“太阴头痛,必有痰”之说,辨此例属脾虚失运,痰浊阻遏,清阳不升,浊阴不降。拟健脾化痰升清降浊之法,投香砂六君子汤加味:蔓荆子、广木香、缩砂仁各7克,西党参、漂白术、法半夏、云茯苓、广陈
免疫治疗是目前肿瘤治疗的焦点,通过调动机体免疫系统识别和杀灭肿瘤细胞。CTL细胞是免疫治疗的中心效应细胞,对肿瘤细胞具有特异性杀伤能力。基于此,以解除T细胞免疫抑制为机理的免疫检查点阻断疗法近年来被广泛应用于临床抗肿瘤治疗,并取得良好疗效。此外,通过直接编辑T细胞,例如嵌合抗原受体T(Chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞疗法在多种血液瘤治疗中也显示出很好的肿瘤消
近几十年来伴随着免疫缺陷患者数量的增加,临床感染性疾病的发生率逐年上升,其中侵袭性真菌感染是导致免疫缺陷患者高死亡率的重要原因之一。目前,用于治疗全身系统性真菌感染的药物种类十分有限,多烯类、唑类和棘白菌素类是主要可供选择的药物。而且随着抗真菌药物的使用真菌耐药大量出现,进一步增加了真菌感染的治疗难度。此外,许多常规抗真菌药物,如两性霉素B、伏立康唑和伊曲康唑还存在严重的毒性,不能长期和大剂量使用
癌症是当今全球致死率最高的疾病之一,随着肿瘤耐药性的产生,临床一线用药很难有效杀灭患者体内的肿瘤细胞,达到预期治疗效果。因此,基于新机制、新靶点的抗肿瘤药物研发具有重大意义。众所周知,异常的细胞分裂是肿瘤细胞最显著的特征之一。Cdc25磷酸酶(cell division cyclin 25 phosphatase)是一种细胞分裂周期调控蛋白,其可促进肿瘤细胞的分裂与增值,并在多种肿瘤细胞中过量表达
肺癌是世界上死亡率最高的癌症类型之一,随着临床治疗技术的优化和新型药物的应用,肺癌患者的五年生存率不断提高,但整体情况仍不容乐观。因此继续寻找安全有效的肺癌治疗药物一直是药物学家们的日标。凋亡(Apoptosis)在细胞程序性死亡中最为常见,临床应用的多数化疗药物均通过诱导细胞凋亡而抑制肿瘤细胞增殖,但凋亡抵抗的出现降低了传统化疗药的作用,因此靶向非凋亡性细胞程序死亡的药物开发吸引了研究者们的注意
跨文化传播学在改革开放之后传入中国并正为建构一种“本土化”的学术典范而努力。现代新儒家是一个与跨文化传播息息相关的学术共同体,现代新儒学亦与跨文化传播紧密缠绕。从现代新儒学中发掘跨文化传播思想乃是跨文化传播学本土化与儒学现代化相向而行的共同要求。学界通常以“三代四群”的架构为新儒家断代,每一代(群)新儒家跨文化传播思想都表现出了一以贯之而又各具时代特色的思想品质。作为第一代第一群新儒家的代表,梁漱
微生物是小分子药物的重要来源,其中,放线菌因其强大的天然产物合成能力一直备受天然产物研究人员的关注。在放线菌天然产物基础研究领域,新颖放线菌资源、新天然产物的发现以及新生物合成途径的阐明仍是现阶段和未来相当长一段时间内不变的主题,本论文分别从这三方面开展了研究。美登木素产生植物根际土壤放线菌的分离与筛选。为了寻找“植物来源的美登木素类化合物由其内生菌产生”的证据,我们对滑桃树(Trewia nud
<正> 笔者1989~1990年,应用川芎茶调散加减,治疗各证型的头痛,疗效颇著,现总结如下:方药及加减川药15克荆芥12克防风10克细辛4克白芷10克薄荷10克羌活10克甘草6克茶叶5克.在临床上根据病因及疼痛的性质加减:风寒头痛原方服用,细辛用至6克;风热头痛去细辛加石膏、菊花;风湿头痛加独活、苍耳子、蔓荆子;肝火头
研究背景顺铂是临床上应用最为广泛的抗肿瘤药物之一,对于乳腺癌、宫颈癌等实体瘤具有显著疗效,但是同时存在着严重的副作用,肾毒性是顺铂的剂量限制性毒性,极大的限制了其临床应用。TWEAK是肿瘤坏死因子配体超家族的成员,在体内参与炎症反应、组织修复等过程。TWEAK及Fn14在正常肾组织中的表达水平较低,在组织应激或损伤时表达明显上调,在肾间质损伤、纤维化等多种肾脏疾病中均观察到TWEAK表达上调,但是