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目的:研究资木瓜中所含的几类活性成分及其含量,建立细胞模型筛选具有抑制肥大细胞脱颗粒作用的活性成分,建立CIA小鼠模型研究筛选出的资木瓜活性成分对该动物模型的作用及机制。 方法:(1)紫外分光光度法检测资木瓜中总皂苷和总黄酮的含量;(2)高效液相色谱法检测资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量;(3)通过系统溶剂法、D101大孔吸附树脂、正反相硅胶、制备液相等分离法,结合LC-MS,NMR等现代仪器分析方法分离鉴定资木瓜所含单体成分;(4)通过RBL-2H3细胞脱颗粒实验筛选具有抑制肥大细胞脱颗粒活性的成分段;(5)取10周龄DBA/1小鼠28只,随机均分为4组(n=7):正常组、模型组、低剂量组和高剂量组。使用牛二型胶原和弗氏完全佐剂建立小鼠CIA模型,连续给药3周,颈椎脱臼处死小鼠。取小鼠血清、四肢、脾脏,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-2、IL-4含量,四肢脱钙包埋切片后进行HE染色。脾脏称重后计算脾指数。(6)免疫组化法检测各组小鼠四肢滑膜组织中肥大细胞类胰蛋白酶和Treg细胞FOXP3的表达变化。(7)TUNEL法检测各组小鼠四肢滑膜组织中滑膜细胞凋亡变化。 结果:(1)资木瓜产区五个县市所产木瓜中总皂苷和总黄酮的含量分别在35.41-58.29 mg/g、4.09-4.69 mg/g之间。齐墩果酸含量在0.60%-0.90%之间,熊果酸含量在0.17%-0.45%之间,齐墩果酸加熊果酸总含量在0.91%-1.07%之间。(2)从资木瓜NBF-50%中分离出单体成分莽草酸丁酯。(3)RBL-2H3细胞脱颗粒实验显示NBF-50%对脱颗粒的抑制作用较好。(4)与空白组相比,模型组小鼠四肢的关节炎评分和足肿胀度均明显升高,低剂量组和高剂量组小鼠的关节炎评分和足肿胀度也有所升高,但相比于模型组,程度减轻,且高剂量组减轻更明显。HE染色结果显示模型组小鼠关节病理破坏严重、滑膜有向关节腔内增生趋势,而低、高剂量组小鼠呈浓度依赖性的改善。(5)类胰蛋白酶检测结果显示,相对于空白组,模型组小鼠滑膜组织中类胰蛋白酶阳性表达的肥大细胞数量显著增多,低、高剂量组小鼠类胰蛋白酶阳性表达的肥大细胞数量相比模型组回落,且呈剂量依赖性。(6)免疫组化检测FOXP3表达发现,模型组小鼠滑膜组织中几乎无FOXP3表达,而低剂量组中出现FOXP3阳性表达,高剂量组中FOXP3阳性表达增加。(7)血清ELISA检测发现,相比于正常组,模型组小鼠血清TNF-α和IL-2水平显著升高,低剂量组有所降低、高剂量组显著降低,而模型组小鼠血清IL-4水平相比正常组降低,给药组呈剂量依赖性升高。(8)TUNEL检测小鼠四肢滑膜组织滑膜细胞凋亡结果显示,与正常组相比,模型组滑膜细胞凋亡无明显变化,而低高剂量组滑膜细胞凋亡增加,且高剂量组滑膜细胞凋亡增加更为明显。 结论:长阳木瓜中总皂苷和总黄酮的含量分别为46.49 mg/g、4.09 mg/g,五个样本中长阳木瓜齐墩果酸含量最高,为0.90%,齐墩果酸加熊果酸总含量也最高,为1.07%。在系统分离资木瓜所得成分段中,NBF-50%对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用较好,并从其中分离出含量最大的单体成分-莽草酸丁酯。选择NBF-50%作为动物实验的干预药物,给药后,CIA小鼠的症状减轻,说明NBF-50%对小鼠CIA具有治疗作用。可能通过抑制肥大细胞脱颗粒,减少类胰蛋白酶的释放,升高Treg细胞活性,从而降低Th1细胞活性,升高Th2细胞活性,恢复Th1/Th2平衡,促进滑膜细胞凋亡,发挥抗RA作用。