目的多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种常见的生殖内分泌代谢性疾病,影响着6%～15%育龄期妇女。但PCOS的发病机制尚未完全阐明。大量研究表明,颗粒细胞（granulosa cells,GCs）的功能异常是导致PCOS的主要机制之一,主要表现为GCs的增殖或凋亡及激素分泌发生异常。已有研究证实,卵巢GCs的凋亡可导致卵泡闭锁,从而参与PCOS的发病。钙库操作性钙离子通道（Store-operated Ca2+entry,SOCE）在葡萄糖和脂质代谢、炎症、激素分泌和细胞增殖中发挥作用。基质相互作用分子（stromal interaction molecules,STIMs）和钙激活-释放调控钙分子（calcium release-activated calcium modulators,Orais）是 SOCE 的重要组成部分。SARAF（TMEM66）是一种Ⅰ型单程内质网膜驻留蛋白,它通过调节STIM或Orai蛋白来调节细胞内Ca2+的浓度,进而影响细胞内钙信号的传导。目前关于SOCE和SARAF在PCOS发病机制中的潜在作用仍不清楚。本研究首先通过检测STIMs,Orais和SARAF在PCOS患者和对照患者GCs中的差异性表达,并对基因表达水平与临床基线水平进行相关性分析,探究与PCOS临床表型之间的联系性;随后进一步进行体外实验,主要通过构建SARAF过表达的人颗粒细胞系,探究SARAF在GCs增殖凋亡和细胞周期中所发挥的作用,以及其对相应信号通路的调控模式。方法本项研究收集了接受体外受精胚胎移植术（invitro fertilization and embryo transfer.IVF-ET）的PCOS患者和对照患者所捐赠用于科研的GCs。PCOS患者组采用鹿特丹标准进行诊断,对照患者组为月经规律,因输卵管因素、男方因素或不明原因不孕进行IVF的患者。通过实时定量PCR对STIMs,Orais和SARAF在GCs中的表达水平进行了分析。二分类回归分析用于确定经BMI和年龄调整后影响PCOS的因素。Pearson相关性分析用于确定STIMs,Orais和SARAF表达水平与患者临床基线水平之间的相关性。在体外功能研究中,应用腺病毒转染技术构建了过表达SARAF人颗粒细胞系（KGN）,通过实时定量PCR和Western blot技术检测过表达效率。采用CCK-8分析SARAF对GCs活性的影响;采用流式细胞术分析SARAF对KGN细胞周期和凋亡的影响;采用EDU法检测SARAF对KGN细胞增殖的影响;采用Western blot检测过表达SARAF颗粒细胞凋亡标志基因和周期标志基因的表达变化,以及分析了过表达SARAF的KGN细胞对SOCE通道主要分子的表达调控。结果与对照患者相比,PCOS患者GCs中STIM1,STIM2,Orai1,Orai2和SARAF的表达显著增加,而Orai3的表达显著降低。校正BMI和年龄后,二分类回归分析结果表明STIMs和Orais的表达水平是影响PCOS的因素。此外,这些基因的表达水平主要与激素水平和窦卵泡计数相关。利用人颗粒细胞系过表达SARAF,发现过表达SARAF能够降低细胞的活力,促进细胞的凋亡以及抑制细胞的增殖,并且发现过表达SARAF能够将细胞周期阻滞在G1/S期,进一步检测发现其显著抑制SOCE通道中STIM1和Orail的表达,由此推测SARAF可能通过调节细胞中SOCE从而导致PCOS中颗粒细胞的凋亡。结论SARAF可能通过调控SOCE通道参与到细胞内异常钙信号传达而导致卵巢颗粒细胞功能的障碍,进而参与到PCOS的发生发展中。