中国明对虾核转录因子NF-κB家族基因的克隆与表达分析

来源 :中国科学院海洋研究所 | 被引量 : 8次 | 上传用户:and113
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对虾流行病爆发以来,我国乃至世界的对虾产业一直受到各种虾病的困扰,对虾养殖业严重受阻。解决这一问题的关键是加强对虾免疫机制的研究,并在此基础上寻找对虾疾病防治的有效方法。Rel/NF-κB是一类核转录因子,在无脊椎动物的先天性免疫中,起着极为重要的作用。本论文根据其他无脊椎动物中NF-κB家族基因Relish和Dorsal的保守氨基酸序列分别设计简并引物,从中国明对虾血细胞cDNA中先后克隆到了Relish和Dorsal基因的部分片段,并结合SMART-RACE技术分别获得了中国明对虾Relish基因(FcRelish)和Dorsal基因(FcDorsal)的cDNA全长。FcRelish的cDNA全长为2157个碱基,其中开放阅读框为1512个碱基,编码504个氨基酸;FcRelish蛋白的推导分子量为57373.5 Da,理论等电点为7.00。FcDorsal基因的cDNA全长为1627个碱基,其中开放阅读框为1071个碱基,编码357个氨基酸;FcDorsal蛋白的推导分子量为39780.7 Da,理论等电点为8.85。分析了FcRelish基因和FcDorsal基因的在血细胞、淋巴器官、肠和肌肉等12个组织中的表达水平。组织表达结果表明FcRelish和FcDorsal在淋巴器官和血细胞中表达水平明显高于其他组织,而淋巴器官和血细胞是对虾免疫系统中最重要的两个组织,由此可以推测中国明对虾中的Relish和Dorsal可能与免疫关系密切。本论文还利用实时荧光定量PCR技术,对灭活鳗弧菌刺激,以及WSSV病毒刺激后,对虾血细胞和淋巴器官中FcRelish基因和FcDorsal基因的转录水平进行了研究。FcRelish基因在WSSV病毒刺激后,在血细胞和淋巴器官中都出现了波浪形变化,说明FcRelish对WSSV病毒刺激产生了应答。在灭活鳗弧菌刺激后,FcRelish在血细胞中变化不明显,而在淋巴器官中出现了两次明显的下调上调交替,出现这种现象的具体原因有待探究。在WSSV病毒刺激后,血细胞和淋巴器官中FcDorsal的转录表达呈波浪形变化。而在鳗弧菌刺激后,FcDorsal在血细胞和淋巴器官中的转录均在短时间内出现明显的上调表达,说明FcDorsal对鳗弧菌非常敏感。作为核转录因子的NF-κB蛋白的转录激活作用需要在细胞质中通过蛋白水解作用来激活,为了进一步阐明NF-κB对病菌感染的应答机制,需要进一步研究这两种转录因子在蛋白水平的变化,以便从分子水平阐明NF-κB在对虾天然免疫中的作用。
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