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背景
原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性肿瘤之一，起病隐匿，预后极差，早期诊断和及时治疗是提高肝癌患者生存期最为有效的手段。血清学辅助诊断是目前协助检查、监测及评估HCC预后的重要方法之一。近年来的研究发现，在肿瘤发生发展的过程中，由于机体免疫应答效应，HCC患者体内会产生针对肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigens, TAAs)的自身抗体。这些自身抗体能够在患者出现临床症状前3-5年内产生，有助于HCC的早期诊断，其中抗p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体已被不少文献报道可稳定存在于HCC患者的血清，对HCC的诊断具一定的敏感性与高度的特异性；此外，课题组的前期小样本实验发现针对TIF1γ的IgA与IgG型自身抗体对HCC早期患者亦具诊断价值。
目的
本研究，拟在扩大的样本范围内检测HCC早期患者血清针对TIF1γ的IgA与IgG抗体(前期小样本实验的基础上)，以及抗p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体(文献报道)，深入探讨四种自身抗体对HCC的早期诊断性能；并通过比较、分析，探讨自身抗体组合检测以及联合常规抗原类肿瘤标志物检测对HCC早期诊断的价值。
方法
1.采用构建的ELISA法在大样本范围内研究血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体检测对HCC早期诊断的性能。研究对象包括早期(Ⅰ/Ⅱ期)HCC患者140例、晚期(III/IV期)HCC患者110例、肝脏良性病变(HBL)患者110例、健康对照(HC)130例。
2.采用免疫印迹(western blotting)法验证HCC早期患者血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体的ELISA检测结果。
3.采用免疫组织化学技术检测TIF1γ、p53、CTAG1A蛋白在HCC早期患者癌组织和配对癌旁组织中的表达情况。
4.比较、分析四种自身抗体不同组合检测方式对HCC早期诊断的性能，建立对HCC早期患者具理想诊断价值的自身抗体组合检测模式。
5.采用化学发光法检测同一研究对象血清中四种HCC常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9、AFP和PIVKA-Ⅱ的水平，研究四种常规抗原类标志物检测对HCC早期诊断的性能。
6.分析自身抗体组合与常规抗原类肿瘤标志物联合检测对HCC早期诊断性能的差异，以提高对HCC早期诊断的性能。
结果
1.血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体在HCC早期患者的阳性率和水平均明显高于HBL组/HC组(P<0.01)，其中抗TIF1γ-IgA的AUC为0.677，敏感性24.3%，特异性97.1%；抗TIF1γ-IgG的AUC为0.654，敏感性26.4%，特异性96.7%；抗p53-IgG的AUC为0.771，敏感性25.7%，特异性97.1%；抗CTAG1A-IgG的AUC为0.716，敏感性20.0%，特异性93.8%。
2.血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体的westernblotting检测结果与ELISA的检测结果相符。
3.免疫组织化学技术检测TIF1γ、p53、CTAG1A蛋白的表达情况，结果显示ELISA测定结果为阴性(－)的HCC早期患者的癌组织和配对癌旁组织中3种蛋白呈现弱阳性表达；ELISA测定结果为阳性(＋)的HCC早期患者的癌组织中3种蛋白的强阳性表达率明显高于配对癌旁组织(P<0.01)。
4.四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG的组合检测对HCC早期患者的AUC最高，达0.807(95%CI 0.764-0.846)，敏感性52.1%，特异性90.8%。
5.四种常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9、AFP及PIVKA-Ⅱ对HCC早期患者的阳性率和水平均明显高于HBL组/HC组(P<0.01)，其中CEA的AUC为0.670，敏感性28.6%，特异性92.1%；CA19-9的AUC为0.736，敏感性35.0%，特异性90.0%；AFP的AUC为0.656，敏感性55.0%，特异性89.7%；PIVKA-Ⅱ的AUC为0.787，敏感性58.6%，特异性92.9%。
6.四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG组合与两种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、PIVKA-II的联合检测可将对HCC早期患者的AUC提高至0.914，敏感性提高至79.3%。
结论
1.抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体对HCC早期患者均具有较好的诊断性能，其中以抗p53-IgG抗体的AUC最高。不同自身抗体组合模式中，以四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG抗体的组合检测对HCC最具早期诊断价值。
2.CEA、CA19-9、AFP和PIVKA-II对HCC的早期诊断具有较好的价值，其中以PIVKA-Ⅱ对HCC早期患者的AUC最高。
3.抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG组合与两种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、PIVKA-II的联合检测，有助于提高HCC早期患者的诊断性能。
原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性肿瘤之一，起病隐匿，预后极差，早期诊断和及时治疗是提高肝癌患者生存期最为有效的手段。血清学辅助诊断是目前协助检查、监测及评估HCC预后的重要方法之一。近年来的研究发现，在肿瘤发生发展的过程中，由于机体免疫应答效应，HCC患者体内会产生针对肿瘤相关抗原(Tumor-associated antigens, TAAs)的自身抗体。这些自身抗体能够在患者出现临床症状前3-5年内产生，有助于HCC的早期诊断，其中抗p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体已被不少文献报道可稳定存在于HCC患者的血清，对HCC的诊断具一定的敏感性与高度的特异性；此外，课题组的前期小样本实验发现针对TIF1γ的IgA与IgG型自身抗体对HCC早期患者亦具诊断价值。
目的
本研究，拟在扩大的样本范围内检测HCC早期患者血清针对TIF1γ的IgA与IgG抗体(前期小样本实验的基础上)，以及抗p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体(文献报道)，深入探讨四种自身抗体对HCC的早期诊断性能；并通过比较、分析，探讨自身抗体组合检测以及联合常规抗原类肿瘤标志物检测对HCC早期诊断的价值。
方法
1.采用构建的ELISA法在大样本范围内研究血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体检测对HCC早期诊断的性能。研究对象包括早期(Ⅰ/Ⅱ期)HCC患者140例、晚期(III/IV期)HCC患者110例、肝脏良性病变(HBL)患者110例、健康对照(HC)130例。
2.采用免疫印迹(western blotting)法验证HCC早期患者血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体的ELISA检测结果。
3.采用免疫组织化学技术检测TIF1γ、p53、CTAG1A蛋白在HCC早期患者癌组织和配对癌旁组织中的表达情况。
4.比较、分析四种自身抗体不同组合检测方式对HCC早期诊断的性能，建立对HCC早期患者具理想诊断价值的自身抗体组合检测模式。
5.采用化学发光法检测同一研究对象血清中四种HCC常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9、AFP和PIVKA-Ⅱ的水平，研究四种常规抗原类标志物检测对HCC早期诊断的性能。
6.分析自身抗体组合与常规抗原类肿瘤标志物联合检测对HCC早期诊断性能的差异，以提高对HCC早期诊断的性能。
结果
1.血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体在HCC早期患者的阳性率和水平均明显高于HBL组/HC组(P<0.01)，其中抗TIF1γ-IgA的AUC为0.677，敏感性24.3%，特异性97.1%；抗TIF1γ-IgG的AUC为0.654，敏感性26.4%，特异性96.7%；抗p53-IgG的AUC为0.771，敏感性25.7%，特异性97.1%；抗CTAG1A-IgG的AUC为0.716，敏感性20.0%，特异性93.8%。
2.血清抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体的westernblotting检测结果与ELISA的检测结果相符。
3.免疫组织化学技术检测TIF1γ、p53、CTAG1A蛋白的表达情况，结果显示ELISA测定结果为阴性(－)的HCC早期患者的癌组织和配对癌旁组织中3种蛋白呈现弱阳性表达；ELISA测定结果为阳性(＋)的HCC早期患者的癌组织中3种蛋白的强阳性表达率明显高于配对癌旁组织(P<0.01)。
4.四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG的组合检测对HCC早期患者的AUC最高，达0.807(95%CI 0.764-0.846)，敏感性52.1%，特异性90.8%。
5.四种常规抗原类肿瘤标志物CEA、CA19-9、AFP及PIVKA-Ⅱ对HCC早期患者的阳性率和水平均明显高于HBL组/HC组(P<0.01)，其中CEA的AUC为0.670，敏感性28.6%，特异性92.1%；CA19-9的AUC为0.736，敏感性35.0%，特异性90.0%；AFP的AUC为0.656，敏感性55.0%，特异性89.7%；PIVKA-Ⅱ的AUC为0.787，敏感性58.6%，特异性92.9%。
6.四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG组合与两种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、PIVKA-II的联合检测可将对HCC早期患者的AUC提高至0.914，敏感性提高至79.3%。
结论
1.抗TIF1γ-IgA、TIF1γ-IgG、p53-IgG、CTAG1A-IgG抗体对HCC早期患者均具有较好的诊断性能，其中以抗p53-IgG抗体的AUC最高。不同自身抗体组合模式中，以四种自身抗体抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG抗体的组合检测对HCC最具早期诊断价值。
2.CEA、CA19-9、AFP和PIVKA-II对HCC的早期诊断具有较好的价值，其中以PIVKA-Ⅱ对HCC早期患者的AUC最高。
3.抗TIF1γ-IgA+TIF1γ、p53、CTAG1A-IgG组合与两种常规抗原类肿瘤标志物CA19-9、PIVKA-II的联合检测，有助于提高HCC早期患者的诊断性能。