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第一部分:miR-138靶向MLK3在高原肺动脉高压形成中的调控机制研究目的:高原肺动脉高压（High-altitude pulmonary hypertension,HAPH）是高原低压低氧引起以肺血管阻力持续性升高和肺血管重塑为特征的渐进性疾病。HAPH的具体发病机制仍然未完全明确,目前还缺乏有效的临床治疗措施。文献报道,某些microRNA与低氧性肺血管重构密切相关。MiR-138具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡和抗炎等多种作用。本研究旨在探索miR-138及MLK3在小鼠HAPH形成过程中的调控作用。方法:将32只C57BL/6雄性小鼠按体重随机分为5000米高原组和对照组,其中高原组又分为hypoxia+生理盐水（NS）组、hypoxia+antagomir-NC组及hypoxia+antagomir-138组,每组各8只。将高原组小鼠置于低压氧舱内模拟高原5000米低压低氧环境持续3周,并于第3、6、9、12、15、18、21天按8μg/g通过尾静脉分别注射NS、antagomir-NC及antagomir-138,对照组小鼠置于平原正常氧浓度环境饲养并注射等量的NS。于饲养的第22天采集小鼠的超声心动图指标、检测小鼠肺动脉压力、收集心脏和肺组织。QRT-PCR检测小鼠肺组织miR-138及MLK3的mRNA表达;免疫组化定位小鼠肺动脉MLK3蛋白表达;HE染色、改良Masson染色及天狼星红染色等用于评价小鼠外周肺动脉和右心室肌的病理改变。Western blot法检测小鼠肺组织中MLK3及其下游通路JNK/c-jun的蛋白变化。Tunel法检测小鼠肺组织的凋亡水平;Western blot和免疫组化等技术检测小鼠肺组织中凋亡相关蛋白的表达。结果:1.与对照组相比,hypoxia+NS组小鼠的miR-138表达水平、右心室内径、右心室内径/左心室内径、室间隔厚度、肺动脉收缩压及右心室肥厚指数均显著升高;而与hypoxia+antagomir-NC组相比,hypoxia+antagomir-138组上述所有指标均显著降低。病理染色显示,与对照组相比,hypoxia+NS组的肺血管管壁增厚、管腔狭窄进而发生肺血管重构,且右心室肌及肺血管胶原纤维的纤维化程度明显增加;而与hypoxia+antagomir-NC 组相比,hypoxia+antagomir-138 组的肺血管重构减轻、右心室肌和肺血管胶原纤维的纤维化程度显著改善。2.QRT-PCR、Western blot 及免疫组化提示 hypoxia+antagomir-138组肺组织中MLK3的mRNA及蛋白水平均较hypoxia+antagomir-NC组显著增加,进一步Western blot发现MLK3下游分子JNK/c-jun的磷酸化水平也显著增加。3.Tunel结果提示hypoxia+NS组的肺组织凋亡水平较对照组降低,而拮抗 miR-138 后,与 hypoxia+antagomir-NC 组相比,hypoxia+antagomir-138组的肺组织凋亡水平显著增加;进一步 Western blot及免疫组化结果发现与对照组相比,hypoxia+NS组外周肺动脉组织促凋亡蛋白cleaved caspase-3显著降低而抗凋亡蛋白bcl-2显著升高,而与 hypoxia+antagomir-NC 组相比,hypoxia+antagomir-138 组外周肺动脉组织促凋亡蛋白cleaved caspase-3明显升高而抗凋亡蛋白bcl-2明显降低。结论:1.模拟高原5000米连续3周可成功构建小鼠HAPH模型,在HAPH小鼠肺组织中,miR-138的表达较对照组显著上调。2.MLK3为miR-138负性调控的靶蛋白,尾静脉注射miR-138拮抗剂可明显激活MLK3/JKN/c-jun信号通路并改善低氧导致的肺血管重构,预防小鼠HAPH形成。3.拮抗miR-138的表达可促进低氧诱导小鼠的肺血管组织凋亡,提示miR-138可能是HAPH形成中的关键调控分子。第二部分:NLR在先天性心脏病相关肺动脉高压患儿围术期中的预测价值目的:探索中性粒细胞与淋巴细胞比例（Neutrophil to Lymphocyte Ratio,NLR）与先天性心脏病相关肺动脉高压（Congenital heart disease associated with Pulmonary arterial hypertension,CHD-PAH）儿童患者接受体外循环（Cardiopulmonary bypass,CPB）心脏直视手术后早期临床预后的关系及其预测机械通气时间延长的临床价值。方法:回顾性分析从2013年1月至2019年8月在西部战区总医院心血管外科接受CPB正中开胸手术的190例CHD-PAH儿童患者。收集围术期所有临床数据。分析NLR与围术期临床指标的相关性,通过绘制ROC曲线评价术前及术后NLR水平作为延长机械通气预测指标的可靠性。结果:术前NLR与术后谷草转氨酶,总胆红素,肌酐,尿酸显著相关（均P＜0.05）;术后NLR与术后谷丙转氨酶,谷草转氨酶,尿素氮显著相关（均P＜0.05）。术后中性粒细胞计数和NLR较其术前显著增加,而术后淋巴细胞计数较术前显著减少（均P＜0.05）。术前NLR与机械通气时间、重症监护时间及总的住院时间显著相关（均P＜0.05）;而术后NLR仅与机械通气时间及重症监护时间显著相关（均P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示术前及术后NLR预测机械通气时间延长24h、48h、72h的曲线下面积均具有统计学意义（均P＜0.05）。结论:1.NLR与CHD-PAH儿童患者围术期中的脏器功能储备显著相关,并与心脏术后早期临床结局密切相关。2.NLR可以作为预测CHD-PAH患儿机械通气时间延长的新指标。