TGF-β1对人甲状腺癌细胞HMGA1表达的影响及机制初步研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:Jiang0596
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目的:探讨TGF-β1对人甲状腺癌SW579细胞中HMGA1表达的影响及其初步机制。方法:体外培养人甲状腺癌SW579细胞作为研究对象。(1)RT-PCR及实时定量PCR从核酸水平观察TGF-β1对SW579细胞HMGA1表达的量效和时效影响。(2)免疫荧光及Western Blotting从蛋白水平分析TGF-β1对SW579细胞HMGA1表达的量效和时效影响(。3)双荧光素酶检测观察TGF-β1对SW579细胞HMGA1启动子活性量效和时效的影响。(4)RT-PCR、实时定量PCR及免疫荧光等分别从核酸水平和蛋白水平探讨TGF-β1对HMGA1表达影响可能所涉及的信号通路。结果:1. RT-PCR、实时定量PCR、免疫荧光及Western Blotting结果显示:与对照组相比,不同浓度TGF-β1能上调甲状腺癌SW579细胞中HMGA1的表达,有统计学意义(P<0.05)。在浓度为5ng/ml时达最大上调作用。2. RT-PCR结果显示:TGF-β1在甲状腺癌SW579细胞中作用8h及12h时能上调HMGA1的表达,有统计学意义(P<0.05),且在作用8h时已达最大上调作用。免疫荧光结果显示:TGF-β1在甲状腺癌SW579细胞中作用2h、4h、8h及12h时能上调HMGA1的表达,均有统计学意义(P<0.05),且在作用8h时达最大上调作用。3.成功提取出含有HMGA1启动子的质粒,将其转染SW579细胞,用双荧光素酶报告系统进行检测,检测结果显示:不同浓度的TGF-β1均能激活HMGA1的启动子活性,有统计学意义(P<0.05),且在浓度为5ng/ml时已达最大激活作用。TGF-β1在作用8h及12h时均能激活HMGA1的启动子活性,有统计学意义(P<0.05),且在作用8h时达最大激活作用。4.用PI3K-Akt和MEK-ErK信号通路相关抑制剂(Wortmannin、U0126、PD98059)处理SW579细胞,通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫荧光、启动子活性测定等实验进行检测,结果表明:TGF-β1对甲状腺癌SW579细胞HMGA1的表达有上调作用(P<0.05),抑制剂(Wortmannin、U0126、PD98059)均能抑制TGF-β1的这种上调作用,均有统计学意义(P<0.05),提示PI3K-Akt和MEK-ErK信号通路可能参与了人甲状腺癌细胞中TGF-β1对HMGA1表达的调控过程。结论:1. TGF-β1能上调甲状腺癌SW579细胞中HMGA1的表达,激活HMGA1的启动子活性。2. TGF-β1在甲状腺癌SW579细胞中可能通过PI3K-Akt和MEK-ErK信号通路上调HMGA1的表达。
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