羧酸酯酶2（carboxylesterases 2,CE2）可催化水解含羧酸酯键、酰胺键、硫酯键等酯类环境毒物及致癌物,已作为拟除虫菊酯类农药的生物标志物而被广泛应用。用小分子探针底物测定生物标志物的活性,可快速、灵敏的反应环境样品和生物体内的污染物的浓度和毒性。本文以新型人羧酸酯酶（human carboxylesterases 2,hCE2）特异性荧光探针（比率型双光子荧光探针NCEN和近红外探针底物DDAB）开展毒物代谢酶CE2荧光探针种属差异及其配体结合位点的探索。（1）通过探针在不同种属肝微粒体中代谢轮廓和几种酯酶特异抑制剂对DDAB水解的抑制情况,结合不同种属间羧酸脂酶（Carboxylesterases CEs）氨基酸序列同源性对比结果和CE2倾向于代谢小酰基、大醇基底物结构特点,通过比较代谢动力学常数V_max和K_m明确探针DDAB与NCEN在不同生物种属间的代谢差异。（2）利用同源模建,获得hCE2蛋白结构,并通过分子对接计算和动力学抑制实验预测荧光探针DDAB、NCEN和FD（商品化h CE2荧光探针）与hCE2的配体结合位点。通过以上研究我们获得了NCEN和DDAB在不同种属中的代谢动力学类型,及其动力学参数K_m和V_max,通过比较试验结果与计算数据得出NCEN和DDAB这两种荧光探针在人、大鼠、小鼠、猴、狗和猪肝微粒体中主要是由CE2水解。并得出DDAB、NCEN和FD与hCE2的配体结合位点各不相同。为之后利用探针DDAB和NCEN检测哺乳动物体内CE2催化活性奠定了理论基础,为快速、灵敏、高通量的检测环境样品和生物体内酯类污染物的浓度和毒性提供了有力手段。