【摘 要】
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目的:子痫前期,preeclampsia（PE）为妊娠期特有的高发病率和高致死率疾病,胎盘滋养细胞侵袭不足是导致PE发病的重要因素。hsa-miR518c-5p调控肿瘤侵袭迁移,但在PE中的表达变化以及对滋养细胞侵袭迁移的影响尚无报道。本课题以胎盘组织和滋养细胞系HTR-8/SVneo为研究对象,了解hsa-miR518c-5p通过对滋养细胞侵袭能力的影响,从而探究hsa-miR-518c-5p参
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目的:子痫前期,preeclampsia（PE）为妊娠期特有的高发病率和高致死率疾病,胎盘滋养细胞侵袭不足是导致PE发病的重要因素。hsa-miR518c-5p调控肿瘤侵袭迁移,但在PE中的表达变化以及对滋养细胞侵袭迁移的影响尚无报道。本课题以胎盘组织和滋养细胞系HTR-8/SVneo为研究对象,了解hsa-miR518c-5p通过对滋养细胞侵袭能力的影响,从而探究hsa-miR-518c-5p参与PE发生发展的机制。方法:收集正常孕妇（n=39）和PE患者（n=28）的胎盘组织,通过实时定量PCR（qRT-PCR）及原位杂交法检测hsa-miR5 18c-5p在胎盘中的表达,并对hsa-miR518c-5p与孕妇血压进行相关性分析。在滋养层细胞系HTR-8/SVneo中过表达及沉默hsa-miR518c-5p,进行transwell分析、划痕实验、绒毛外植体培养、Edu细胞增殖实验、流式细胞术等实验,测定hsa-miR518c-5p对滋养层细胞功能的影响,并通过qRT-PCR及蛋白质印迹探讨潜在的分子机制和通过测序筛选差异表达的基因。同时进行了荧光素酶报告基因分析和蛋白质印迹,以验证hsa-miR518c-5p与p120 catenin（p120）的靶向关系。此外,通过免疫荧光、正反向免疫共沉淀验证p120和WISP2的关系,并通过一系列回补实验验证两者对滋养细胞侵袭迁移的调控。结果:PE患者胎盘组织中hsa-miR518c-5p表达降低,其表达与孕妇收缩压、舒张压呈负相关。在 HTR-8/SVneo 中敲低 hsa-miR518c-5p,Snail/E-cadherin 信号通路激活,细胞侵袭能力降低。通过转录组测序,筛选到p120为差异表达基因。体外实验表明p120的表达受hsa-miR518c-5p抑制,而荧光素酶实验结果显示p120是hsa-miR518c-5p的靶基因。p120调控WISP2蛋白表达,继而影响下游Snail/E-cadherin通路。其分子机制为p120与WISP2蛋白分子直接结合,促进WISP2蛋白稳定性。最后通过行回补实验,发现过表达p120可缓解hsa-miR518c-5p调控WISP2/Snail/E-cadherin信号通路、调控滋养细胞侵袭迁移的功能。结论:hsa-miR518c-5p在PE患者胎盘中的表达水平降低。hsa-miR518c-5p通过p120介导WISP2,调控下游Snail/E-cadherin通路,促进滋养细胞侵袭功能。
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