鸡柔嫩艾美耳球虫ROP17的鉴定及其免疫保护效果评价

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鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的肠道寄生虫病。其中,柔嫩艾美耳球虫寄生于鸡盲肠,致病力强,对全世界禽类养殖业危害巨大。柔嫩艾美耳球虫编码大约8000个基因,但是目前关于其棒状体蛋白的研究较少。本研究对柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白17(EtROP17)在裂殖子阶段的表达情况进行了分析并对其免疫保护效果进行了评价。我们以柔嫩艾美耳球虫SD-01株的cDNA为模板扩增ROP17基因片段,并对SD-01株与Houghton株的ROP17碱基序列进行了比较。进一步构建了pET30a-ROP17原核表达载体,转化BL21大肠杆菌感受态,利用IPTG诱导鸡柔嫩艾美耳球虫ROP17重组蛋白(rEtROP17)的表达,并采用His60-Ni柱对rEtROP17进行了纯化。分别以His鼠单克隆抗体和鸡柔嫩艾美耳球虫阳性血清作为一抗,利用Western blot对纯化的rEtROP17进行了鉴定。收集裂殖子和裂殖子总蛋白,利用制备的小鼠抗rEtROP17多克隆抗体为一抗,进行间接免疫荧光和蛋白印迹分析天然EtROP17在裂殖子阶段的表达情况。用加ISA71佐剂乳化的rEtROP17免疫雏鸡,免疫后接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。从鸡只存活率、相对增重率、盲肠病变记分、卵囊减少率和血清IgY抗体水平这五个方面评估rEtROP17对鸡感染柔嫩艾美耳球虫的免疫保护效力。研究结果表明,SD-01株与Houghton株的ROP17核酸序列在1901位置存在一个碱基差异。通过间接免疫荧光和蛋白印迹证明了天然EtROP17在柔嫩艾美耳球虫裂殖子阶段表达。与对照组相比,rEtROP17免疫组的鸡平均体重增加,卵囊排出量减少,盲肠病变减轻,血清IgY水平增加。研究结果显示,EtROP17是潜在的抗柔嫩艾美耳球虫疫苗候选分子。
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