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研究背景及目的子痫前期(preeclampsia,PE)是一种妊娠期特有的疾病,主要临床表现为妊娠20周后出现的高血压(收缩压≥140mmHg和(或)舒张压≥90mmHg)、蛋白尿(尿蛋白>300mg/24h或随机蛋白尿(+))、水肿等,还可造成心、肺、肝、肾等多个器官甚至神经系统的损伤。目前子痫前期在全世界范围内的发病率大约为3%~5%,是造成孕产妇以及围产儿死亡的主要原因之一,给母体和新生儿的健康都带来了严重危害。子痫前期不是由单的一因素所导致的疾病,其病因到目前为止尚不明确,具体的发病机制仍未完全阐明。大多数的研究都认为,子痫前期的发生受到多重因素的影响,无法用单一的因素来解释,子宫螺旋动脉的重铸不足、炎症免疫反应的过度激活、血管内皮细胞的损伤以及遗传因素等均被证实与子痫前期的发生相关。对于其发病机制,目前被普遍接受的是“两阶段”学说,首先在第一个阶段,子宫螺旋动脉的滋养细胞重塑障碍,进而导致胎盘出现缺血、缺氧,促使诸多胎盘因子释放,这一阶段属于临床前期;在第二个阶段:释放的胎盘因子进入母体血液循环,加速激活系统性炎性反应与血管内皮损伤,最终导致子痫前期、子痫多样化临床表现的出现。如果可以在早期对子痫前期进行高效预测,则可及时进行干预,极大程度地实现对于子痫前期的早期预防及治疗,对于降低孕妇及围产儿的死亡率具有重要意义,但目前对于子痫前期尚无有效、可靠和经济的预测手段。越来越多的证据显示,子痫前期是胎盘发育和功能异常的结果,患者的临床症状在胎盘娩出后往往很快可以得到缓解,终止妊娠仍是其唯一有效的治疗措施,但此方法常常伴随医源性早产等问题,同时,其他围生期相关并发症发生的风险也大大增加,影响新生儿的预后。此外,除了在怀孕期间对胎儿造成风险以外,还有证据表明,有宫内妊娠期高血压疾病接触史的胎儿,在产后出现严重、长期心血管后遗症的风险增加,这给母儿及其家庭带来的伤害不可估量。因此,深入研究子痫前期的发病机制,找到能够实现早期诊断及有效治疗的新型分子标志物有着重要的意义。本研究应用高通量测序技术,结合生物信息学分析,寻找能够有效预测子痫前期的新型分子标志物,为临床上对于子痫前期的早期诊断及治疗提供理论基础,以达到减少母儿并发症、提高人口身体素质的目的。材料与方法本研究共分为两个阶段,所有纳入研究的产妇均于2021年1月至2021年12月在郑州大学第一附属医院行剖宫产分娩终止妊娠。在第一阶段共选取6例脐带标本为研究对象,其中3例取自于子痫前期产妇,为研究组,另3例取自于正常产妇,为对照组,分别于剖宫产术中胎盘娩出后收集其脐带组织。应用高通量测序技术检测并鉴定两组共6例脐带组织间充质干细胞中的基因表达情况,描绘其基因表达谱,并利用DESeq2进行基因表达差异性分析。利用生物信息学对两组间所有显著差异表达的基因进行GO分析和KEGG通路分析,再结合相关文献,进一步筛选出5个可能与子痫前期发病相关的目标基因。本研究的第二阶段共选取40例产妇作为研究对象,其中明确诊断为子痫前期的产妇20例为研究组,20例产检正常的健康产妇为对照组,在剖宫产术中胎盘娩出后收集所有产妇的胎盘组织,应用qRT-PCR技术检测前期实验中筛选出的目标基因在两组产妇的胎盘组织中的表达情况。本研究中对于子痫前期的诊断参照第9版《妇产科学》中相应的诊断标准。所有产妇本次均为单胎妊娠,且无妊娠期糖尿病、胎盘早剥、前置胎盘、胎儿畸形等产科并发症及慢性高血压、糖尿病、肾病等内外科合并症。记录所有产妇的基本信息及相关临床资料,包括住院号、年龄、孕周、血压情况等,并记录新生儿的性别、身长、体重及Apgar评分等。分析比较两组产妇及新生儿的一般情况。统计学分析采用SPSS 21.0统计学软件进行,P<0.05差异具有统计学意义。结果1.两组产妇的平均年龄相似,两组间比较无显著差异(P=0.577)。而与正常对照组相比,研究组中产妇的平均分娩孕周(P=0.000)、新生儿出生体重(P=0.000)、身长(P=0.000)、1 分钟 Apgar 评分(P=0.008)及 5 分钟 Apgar 评分(P=0.045)均较低,两组间比较差异均有统计学意义。研究组中产妇的收缩压(P=0.000)及舒张压(P=0.000)均显著高于正常对照组。2.与正常对照组相比,子痫前期组中共检测出异常表达的基因1130种,其中458种显著高表达,672种显著低表达。3.对所有在研究组中呈现显著低表达的基因行生物信息学分析,结果显示这些基因显著富集在血管生成、IL-10等信号通路上。4.根据GO分析结果筛选出5个目标基因(CXCL2、DCN、IL1A、GPNMB和TYMP)扩大样本量进行qRT-PCR验证,结果证实这些基因在子痫前期胎盘组织中呈现显著低表达,与正常妊娠胎盘组织相比差异显著(P<0.05),与前期测序结果相符。结论1.与正常对照组相比,子痫前期产妇的基因表达谱发生了显著变化,存在许多异常表达的基因。2.生物信息学分析显示,在子痫前期产妇中显著异常低表达的基因主要参与调节炎症反应及血管生成等过程。3.目标基因CXCL2、DCN、IL1A、GPNMB和TYMP在子痫前期胎盘组织中显著低表达,或可成为预测子痫前期的新分子标志物。