【摘 要】
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辣椒疫霉菌是一种主要靠土壤传播的致病性卵菌,具有广泛的宿主。辣椒疫霉在侵染寄主时通过分泌大量的Rx LR效应因子干扰植物,促进植物疫病的发生。近年来,辣椒疫病愈发严重,辣椒产业遭受巨大的打击。目前,并没有有效的措施防治该病害,因此,从辣椒疫霉的致病机制出发筛选药物靶标显得至关重要。本文在PcRx LR145及PcRx LR197效应蛋白三维结构的基础上,通过CHIP-Seq、RNA-Seq等技术手
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辣椒疫霉菌是一种主要靠土壤传播的致病性卵菌,具有广泛的宿主。辣椒疫霉在侵染寄主时通过分泌大量的Rx LR效应因子干扰植物,促进植物疫病的发生。近年来,辣椒疫病愈发严重,辣椒产业遭受巨大的打击。目前,并没有有效的措施防治该病害,因此,从辣椒疫霉的致病机制出发筛选药物靶标显得至关重要。本文在PcRx LR145及PcRx LR197效应蛋白三维结构的基础上,通过CHIP-Seq、RNA-Seq等技术手段探索了这两种效应因子在寄主体内的作用机制,并利用Pull-down,微量热涌动（MST）等实验方法验证了疑似互作靶标为阳性,从而确定效应分子的互作靶标并解释了其致病机制,之后将效应蛋白及其互作蛋白表达纯化进行共结晶以期解析出效应蛋白和其互作靶标的复合结构,结果如下:（1）以含有PcRx LR145的转基因拟南芥为材料进行CHIP-Seq实验,结果显示,PcRx LR145可与拟南芥全基因组中5’端含有GAA重复和GAGA重复的DNA序列结合,同时荧光定量PCR证明PcRx LR145可以调控这些基因的表达。（2）微量热泳动（MST）实验验证PcRx LR145可以结合含有GAA和GAGA重复的DNA片段,并测定出其结合力达到了n M级别。（3）培养PcRx LR145和含有GAA和GAGA重复的DNA序列的复合物晶体并进行了复合物的结构解析,但晶体中只含有PcRx LR145蛋白,可能因为DNA柔性过大,不能在晶体中稳定结合。（4）Pull-down实验验证PcRx LR197与RPM1互作蛋白（RIN4）,热激蛋白90（HSP90）互作并证明了辣椒丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（STPK）与RIN4互作,GDP-甘露糖-3,5-差向异构酶（GME）与HSP90互作,证明其存在上下游关系。（5）培养PcRx LR197与其互作蛋白RIN4的复合物晶体,进行复合物结构的解析,目前已长出晶体。从结构生物学角度研究Rx LR效应因子与寄主的互作机制,为揭示辣椒疫霉菌致病机制提供理论基础。
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