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背景和目的据WHO数据显示2020年全球肺癌新发病例约220万,占所有癌症患者的11.4%,其中非小细胞肺癌（Non-Small cell lung cancer,NSCLC）是主要病理类型,占所有肺癌的85%。目前,肺癌的疗效评估主要以影像学检查为主,影像检查通过反映肿瘤组织的大小来反映治疗效果,对于发现肿瘤的进展或复发具有一定的迟滞性,难以及时区分真假进展情况,给后续治疗造成了影响。且随着免疫治疗在临床上的广泛应用,现有的影像学评估方法仅能反映肺部肿瘤及与邻近组织的浸润关系,不能评估自身免疫系统是否被有效调动参与抗肿瘤免疫反应。因此需要新的方法既能反映免疫系统自身的情况,尤其是肿瘤免疫中的主力军T细胞,也能体现抗肿瘤治疗疗效。近年来,随着高通量测序技术（High through put sequencing,HTS）的发展,T细胞表面受体（T cell receptor,TCR）序列所包含的信息被深入挖掘和充分利用,TCR主要由α和β异源二聚体组成,每个T细胞都具有与独特的主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex,MHC）结合的特异性 TCR,TCR 与被呈递抗原的结合导致T细胞激活并引发细胞应答。TCR序列不仅是一种条形码来跟踪T细胞的克隆扩增和迁移,而且是一组特征来告知T细胞的命运和功能。关于TCR复合物被淋巴细胞特异性酪氨酸激酶磷酸化,使一种70 kDa的酪氨酸激酶（70-kDa zeta-associated protein,ZAP-70）对接和激活从而导致T细胞一系列的反应的基础研究相对较多,但有关TCR序列信息与抗肿瘤治疗疗效和预后的研究却相对较少。本研究对NSCLC患者外周血TCR进行测序,分析其在非小细胞肺癌患者中的特征,同时分析了 TCR多样性与疗效及预后的关系,以及TCR多样性预测疗效的价值和动态检测的意义,为TCR序列有效预测肺癌患者临床疗效提供重要依据。材料和方法1.研究对象收集郑州大学第一附属医院肿瘤科肺癌患者治疗前和治疗2周期后外周血样本以及体检科健康人外周血样本,根据纳入标准和排除标准,选择83例NSCLC患者为研究对象,整理并记录患者的一般临床信息。2.TCR测序方法外周血TCR多样性检测:从外周血中提取RNA进行反转录和V区特异性扩增,建立TCR库,最后进行高通量测序和生物信息学分析。3.TCR多样性与疗效及预后的分析两组患者采用以铂类为基础的双药联合化疗,根据RECIST 1.1标准每两周期进行疗效评价,6周期治疗后将疗效PR和SD的患者分为R（Respond）组,将疗效PD的患者分为NR（No respond）组,本研究中无CR患者。治疗结束后每3个月进行随访。比较R组与NR组患者TCR多样性和CDR3序列应用,分析一般临床特征对TCR多样性的影响,TCR多样性对疗效的预测价值及对预后的影响,对影响PFS和OS的单因素和多因素进行分析,并动态检测TCR多样性的变化。4.统计学分析采用SPSS 26.0进行统计学分析,采用GraphPad Prism 8.0绘制图形。采用卡方检验进行组间一般临床信息比较。对于非正态分布或方差不齐的定量数据,采用Mann-Whitney U检验进行两独立样本比较,结果用中位数和四分位数（M（P25,P75））描述,采用Spearman进行相关性检验,采用Wilcoxon进行两配对样本检验。绘制作受试者工作特征曲线分析TCR多样性对疗效的预测价值,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并行log-rank检验,采用COX回归模型分析影响生存的因素。以α=0.05为检验水准,P＜0.05差异有统计学意义。结果1.R组和NR组的性别、年龄、分期、手术、吸烟史、ECOG评分、病理类型、远处转移等一般临床特征无统计学差异（P＞0.05）。2.健康人外周血TCR多样性高于本研究中的NSCLC患者（0.110 VS 0.084）,R组的TCR多样性、CDR3特有NT序列、CDR3特有AA序列、均高于 NR 组（0.108 VS 0.076;14250VS 10 451;14 764VS 10 761）,R组 TOP20 CDR3序列比例低于NR组（18.70%VS 23.38%）,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。3.患者外周血TCR多样性受年龄、性别、分期、病理类型和手术的影响。年龄≤60岁、女性、分期Ⅰ-Ⅱ期、腺癌、手术患者的TCR多样性分别大于年龄＞60 岁（0.099 VS 0.077）、男性（0.103 VS 0.068）、分期Ⅲ-Ⅳ期（0.107 VS 0.079）、鳞癌（0.103 VS 0.067）、未手术（0.108 VS 0.078）患者,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。4.ROC曲线分析结果显示TCR多样性可以预测患者的疗效（AUC=0.748,95%CI0.642-0.854,P＜0.001）,当阈值是0.101时,预测患者是否获益的灵敏度是66.2%,特异度是89.2%。用阈值将TCR多样性分为两组,高TCR多样性组的PFS和OS均优于低TCR多样性组（9.3 VS 4.0月;20.0 VS 11.4月）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.COX回归分析显示,靶向治疗和高TCR多样性是影响患者PFS的独立保护因素（HR=0.368,P＜0.001;HR=0.281,P＜0.001）,远处转移是影响患者PFS的独立危险因素（HR=1.847,P=0.016）。高TCR多样性是影响患者OS的独立保护因素（HR=0.212,P＜0.001）,远处转移是影响患者OS的独立危险因素（HR=2.842,P=0.003）。6.治疗后R组TCR多样性较治疗前增加（0.143 VS 0.107）,NR组TCR多样性较治疗前减少（0.033 VS 0.076）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论1.NSCLC患者外周血TCR多样性与疗效有关,TCR多样性高的患者治疗效果较好。2.TCR多样性对患者疗效和预后的评估具有重要意义:外周血TCR多样性可以预测患者疗效,高TCR多样性患者,具有更长的PFS和OS,且TCR多样性是影响患者PFS和OS的独立预后因素。3.治疗后获益患者TCR多样性增加,未获益患者TCR多样性减少。