【摘 要】
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目的通过构建昆虫杆状病毒表达载体系统,在昆虫细胞表达ENO1单链抗体,为宫颈癌代谢治疗提供新的参考方向。方法1.在实验室前期基础上,得到ENO1单克隆抗体H1的可变区基因序列,初步构建昆虫杆状病毒表达载体系统（Insect baculovirus expression vector system,IBEVS）的穿梭质粒Bacmid-ENO1mAb。在实验室保存的载体中选择质粒pFast Bac T
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目的通过构建昆虫杆状病毒表达载体系统,在昆虫细胞表达ENO1单链抗体,为宫颈癌代谢治疗提供新的参考方向。方法1.在实验室前期基础上,得到ENO1单克隆抗体H1的可变区基因序列,初步构建昆虫杆状病毒表达载体系统（Insect baculovirus expression vector system,IBEVS）的穿梭质粒Bacmid-ENO1mAb。在实验室保存的载体中选择质粒pFast Bac TMDual,通过基因工程将ENO1单克隆抗体H1的可变区序列连接在pFast BacTMDual质粒上,得到pFast Bac-Dual-ENO1mAb重组质粒并进行PCR及测序验证;将该重组质粒转化至感受态细菌DH10Bac TM中,在辅助质粒编码转座酶的作用下,再经过蓝白斑筛选和PCR分析,重组杆粒Bacmid-ENO1mAb得到验证。2.ENO1单链抗体的初步表达:提取重组杆粒Bacmid-ENO1mAb,通过转染ExpiSf9TM昆虫细胞得到P1代杆状病毒,后续继续扩大感染ExpiSf9TM昆虫细胞得到P2代杆状病毒。通过添加增强剂使该病毒在感染ExpiSf9TM细胞后大量表达ENO1单链抗体。结果:1.pFast Bac-Dual-ENO1mAb重组质粒由华大基因公司合成,并且测序进行了验证;重组质粒pFast Bac-Dual-ENO1mA转座后,经过蓝白斑筛选和PCR验证后在获得的菌落中挑选阳性转座菌落（即白色菌落）,之后提取杆粒获得重组杆粒Bacmid-ENO1mAb。2.在ExpiSf9TM昆虫细胞中初步表达了ENO1单链抗体。结论:本课题成功地构建了昆虫杆状表达载体系统,并且在ExpiSf9TM昆虫细胞中初步表达了ENO1单链抗体,有望为宫颈癌的代谢治疗提供一种新的方向。
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