论文部分内容阅读
饲料中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的存在严重威胁着畜禽健康和人类食品安全。白藜芦醇（Resveratrol,Res）是一种多酚类化合物,可减轻多种外源性物质引起的肝损伤,具有肝脏保护作用;然而,目前尚不清楚它能否改善AFB1致鸭的肝毒性。因此,本实验旨在研究日粮中添加Res对AFB1所致绿头鸭肝脏损伤的影响及其机制。本试验选取270只体重无显著差异的雄性绿头鸭,随机分为3组,每组6个重复栏,每栏15只:对照组,AFB1组和AFB1+Res组,对照组和AFB1组饲喂基础日粮,AFB1+Res组日粮中添加500mg/kg的Res。第70天,AFB1组和AFB1+Res组分别灌胃60μg/kg bw AFB1,对照组灌胃等剂量的磷酸缓冲盐溶液（PBS）。12h后每组6只试验鸭翅静脉采血,取肝脏样本进行后续实验。试验结果如下:（1）Res对AFB1暴露鸭肝功能的影响:与对照组相比,AFB1组的血浆中GLB,ALT和LDH的活性显著升高（P＜0.05）。与AFB1组比较,AFB1+Res组的GLB含量显著降低（P＜0.05）。（2）Res对AFB1暴露鸭肝脏结构的影响:超微结构结果显示,对照组肝细胞排列紧密,结构和形态均正常。AFB1组肝细胞核膜和线粒体膜损伤,细胞核和线粒体空泡化,线粒体肿胀,嵴断裂。AFB1+Res组减轻了AFB1引起的超微结构改变,肝细胞形态、细胞核和线粒体嵴的变化趋于正常。显微结构结果显示,对照组肝细胞形态正常,AFB1组肝细胞空泡化、肿胀和炎性细胞浸润。与AFB1组比较,AFB1+Res组肝细胞肿胀减轻,坏死细胞数量减少。（3）Res对AFB1暴露鸭肝脏氧化应激的影响:与对照组相比,AFB1组鸭肝脏T-AOC、T-SOD、CAT的活性显著降低（P＜0.05）,H2O2含量显著提高（P＜0.05）。与AFB1组相比,AFB1+Res组T-SOD、T-AOC和CAT含量显著升高（P＜0.05）。（4）Res对AFB1暴露鸭肝脏AFB1 I相代谢指标的影响:在绿头鸭血浆和肝脏中,AFB1组的AFB1-DNA加合物含量显著高于对照组（P＜0.05）;AFB1+Res组AFB1-DNA加合物的含量显著低于AFB1组（P＜0.05）。AFB1组绿头鸭肝脏总CYP450含量,CYP1A1、CYP1A4、CYP2A6和CYP3A4的m RNA相对表达量和CYP1A1和CYP3A4的蛋白表达量显著高于对照组（P＜0.05）;AFB1+Res组CYP3A4的m RNA相对表达量和CYP1A1和CYP3A4的蛋白表达量显著低于AFB1组（P＜0.05）。（5）Res对AFB1暴露鸭肝脏AFB1 II相代谢指标的影响:AFB1组肝脏中GSH含量、GST活性和GST和GCLM基因m RNA表达水平显著低于对照组（P＜0.05）;AFB1+Res组GSH含量、GST活性以及GST和GCLC基因m RNA水平显著高于AFB1组（P＜0.05）。（6）Res对AFB1暴露鸭肝脏Nrf2通路相关基因m RNA和蛋白表达的影响:AFB1组肝脏中SOD1和NQO1的m RNA相对表达量和Nrf2和HO-1的蛋白表达量显著低于对照组（P＜0.05）;与AFB1组相比,AFB1+Res组Nrf2的m RNA相对表达量,Nrf2和HO-1的蛋白表达量显著升高（P＜0.05）,AFB1+Res组Keap1的m RNA相对表达量和蛋白表达量显著降低（P＜0.05）。（7）Res对AFB1暴露鸭肝脏炎症因子的影响:AFB1组抑炎性细胞因子IL-10的m RNA相对表达量显著低于对照组（P＜0.05）。与AFB1组相比,AFB1+Res组促炎性细胞因子IL-16和TNF-α的m RNA相对表达量显著降低（P＜0.05）。（8）Res对AFB1暴露鸭肝脏Sirt1和NF-κB的m RNA和蛋白表达的影响:与对照组相比,AFB1暴露显著降低了Sirt1的m RNA相对表达量和蛋白水平,显著增加了NF-κB的m RNA相对表达量和蛋白表达（P＜0.05）。AFB1+Res组Sirt1的m RNA相对表达量和蛋白水平均显著高于AFB1组（P＜0.05）,NF-κB蛋白水平较AFB1组显著降低（P＜0.05）。（9）Res对AFB1暴露鸭肝脏细胞凋亡相关基因m RNA和蛋白表达的影响:与对照组相比,AFB1组Caspase-3、Caspase-9、p53、Bax m RNA相对表达量和Cyt-c、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平均显著提高（P＜0.05）。与AFB1组相比,AFB1+Res组p53 m RNA相对表达量显著降低（P＜0.05）,Cyt-c、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax的蛋白质水平显著降低（P＜0.05）;Bcl-2的蛋白水平显著提高（P＜0.05）。综上所述,在绿头鸭日粮中添加500 mg/kg白藜芦醇可以通过抑制I相酶介导的AFB1的代谢,上调II期代谢酶活性,激活Nrf2信号通路,调节NF-κB信号通路,抑制细胞凋亡通路,减轻AFB1对肝脏造成的损伤。