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背景膀胱癌是我国泌尿外科临床工作中最常见的恶性肿瘤中的一种。膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma, BUC)在膀胱癌中占的比例大约90%以上。目前膀胱癌的治疗以手术为主,但近几年新兴的分子靶向治疗,使我们看到了不通过手术治疗肿瘤的希望。组织蛋白酶B (cathepsin B, CB)属于木瓜蛋白家族,是溶酶体内重要的一种巯基蛋白酶。近年来的研究发现组织蛋白酶B与肿瘤的侵袭和转移等恶性表型相关。但尚无组织蛋白酶B与T24细胞迁移和侵袭相关性的体外研究。目的探讨组织蛋白酶B在人膀胱尿路上皮癌T24细胞中的表达情况；通过组织蛋白酶B的特异性抑制剂CA-074降低组织蛋白酶B蛋白的表达及活性,观察T24细胞的迁移和侵袭力的变化。方法(1)实验准备：购买并传代培养实验用T24细胞。将CA-074用二甲基亚砜(DMSO)溶解成需要浓度。(2)实验分组：正常培养的T24细胞为空白对照组；以不同终浓度的CA-074培养液培养的T24细胞分为4个实验组,分别为0.5μ mol/L浓度组、1μ mol/L浓度组、5μ mol/L浓度组、10μ mol/L浓度组；以含有溶剂DMSO的培养基培养的T24细胞作为实验对照组。分别培养24h、48h、72h后检测相关指标的变化。(3)检测指标及其方法：①采用反转录酶链聚合反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)实验的方法检测T24细胞中组织蛋白酶B的mRNA的表达。②采用组织蛋白酶B裂解底物的实验方法来检测T24细胞中的组织蛋白酶B的蛋白活性。③通过免疫细胞化学(immunocytochemical method)实验的方法来检测T24细胞中的组织蛋白酶B的蛋白表达。④应用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验的方法来检测T24细胞中的组织蛋白酶B的蛋白的表达。⑤通过Transwell小室实验的方法检测T24细胞的迁移和侵袭。(4)统计学分析所有的实验数据均通过SPSS17.0软件处理,组间差异用单因素方差分析的统计学方法进行实验数据处理。以α=0.05为检验标准。结果(1)T24细胞中组织蛋白酶B的mRNA的表达在各组间无明显差异,不具有统计学意义(P>0.05)。(2)T24细胞中组织蛋白酶B的蛋白量的表达及活性的表达均随CA-074浓度的增加及培养时间的延长而降低。与空白对照组对照组及实验对照组比均有统计学意义(P<0.05)。(3)T24细胞随着CA-074浓度的增加及培养时间的延长穿膜细胞数明显减少具有统计学意义(P<0.05)。(4)各空白对照组和实验对照组间各项指标的检测均不具有统计学意义(P>0.05)。结论(1)CA-074对T24细胞的迁移和侵袭均具有明显抑制作用。(2)组织蛋白酶B可能参与了T24细胞的迁移和侵袭,并起到了一定的作用。