【摘 要】
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该文通过原代培养新生乳鼠心肌细胞模型,运用激光共聚焦显微镜、细胞培养和RT-PCR等生物学技术,系统研究镉负荷诱发损伤以及L-Arg、SNP和L-NMMA预处理的镉损伤心肌细胞eNOS m
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该文通过原代培养新生乳鼠心肌细胞模型,运用激光共聚焦显微镜、细胞培养和RT-PCR等生物学技术,系统研究镉负荷诱发损伤以及L-Arg、SNP和L-NMMA预处理的镉损伤心肌细胞eNOS mRNA和iNOS mRNA表达,细胞培养上清液总NOS、eNOS和iNOS活性,细胞培养上清液NO含量变化,初步观察了镉损伤心肌细胞内Ca<2+>的变化及其可能的作用机制.较为深入地探讨了L-Arg、SNP和L-NMMA以及心肌细胞内Ca<2+>稳态在镉损伤的心肌细胞NOS-NO系统活性变化中的作用机制.结果如下:1.新生乳鼠心肌细胞原代培养方法的建立.无菌分离新生乳鼠心脏组织,采用胰蛋白酶消化法分离和培养心肌细胞,通过形态学及台盼蓝染色法鉴定,分离的心肌细胞细胞完整,呈杆状,存活率在90﹪以上.说明该方法是比较理想的心肌细胞培养法,为科学研究提供了细胞模型平台.2.镉诱导心肌细胞NOS mRNA表达及NOS-NO系统活性变化研究.提示:镉负荷引起心肌细胞损伤,影响eNOS mRNA表达,诱导iNOS mRNA表达明显增多,但导致NOS-NO系统活性下降.3.L-Arg、SNP和L-NMMA对镉致心肌细胞损伤的NOS mRNA表达及NOS-NO系统活性的影响.提示:L-Arg可以促使心肌细胞eNOS的mRNA表达和活性增加,并大量合成NO;在外源性L-Arg大量存在的情况下,CdCl<,2>致心肌细胞损伤的iNOS mRNA表达和活性增加但并不能导致NO合成增多,L-NMMA的掺入可以维持这一现象;而SNP能促进细胞大量合成NO的同时却不能维持延长NOS活性水平升高.4.镉致心肌细胞损伤的胞内Ca<2+>变化及其机制探讨.提示:镉导致心肌细胞[Ca<2+>]I外泄,使得[Ca<2+>]i浓度降低可能是镉致心肌细胞毒性损伤重要机制之一.
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