DNA甲基化和染色质重塑对白菜结球的影响

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大白菜属于芸薹属(Brassica rapa ssp.pekinnesis),原产于我国,具有较高的营养价值,经济价值和研究价值。大白菜在我国长江中下游广泛种植,也是我国北方的主要栽培品种。结球作为主要的营养储存器官,它的性状影响着大白菜的产量与商品性。找出调控结球的关键基因,将对未来大白菜育种有着深刻的影响。有研究表明ANGUSTIFOLIA3(AN3)结合的SWI/SNF重塑复合体调节下游转录控制拟南芥的叶片生长,本研究主要探究了 DNA甲基化以及AN3介导的染色体重塑等表观遗传调控方式对白菜结球的影响。在本试验中,利用MeDIP测序技术对白菜结球品种结球前后的甲基化差异基因进行挖掘,对甲基化差异较大基因涉及途径分析,发现生长素信号途径中主要是Aux/IAA相关基因,对所有IAA途径基因作定量分析,探究影响结球生长的关键通路。在结球前后对AN3基因进行定量分析,并利用VIGS技术对AN3以及ULTRAPETALA2(ULT2)进行功能性验证。主要研究结果如下:1.在本研究中,利用MeDIP测序技术,对结球大白菜结球前后的基因进行系统的分析。MeDIP测序共测得97,959,184个长为49bp的双末端序列,比对Reads数分别为76,024,506和77,462,058与参考基因组的比对率分别是77.61%和79.08%。结果表明,在整个结球生长过程中,甲基化水平降低。在甲基化的差异基因中,我们发现代谢和植物激素转导途径显著富集。对植物激素转导途径中,我们选择Aux/IAA基因进行定量分析,发现大部分基因表达与甲基化程度成负相关,叶片不同部位的表达模式有差异,但整体甲基化下调,表达上调。2.本文建立了基于芜菁花叶病毒的VIGS体系,利用VIGS技术诱导白菜,根,茎,叶,花,果荚多个器官的沉默效应。3.在结球前后取样检测AN3基因在叶片不同部位的表达情况,发现AN3基因在结球过程中表达下调。并对AN3基因进行功能性验证。发现沉默AN3基因以及SWI/SNF重塑复合体核心组分BRM基因诱导白菜结球提前,验证了AN3基因能够结合SWI/SNF重塑复合体调控白菜结球。4.分别取白菜二叶期与四叶期的叶片检测ULT2的表达量变化,发现ULT2基因在叶片生长过程中表达下调,利用芜菁花叶病毒质粒pTY-S诱导了白菜内源基因ULT2,发现该基因沉默后导致叶片向上卷曲生长,验证了ULT2对白菜叶型性状有一定的影响。
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