【摘 要】
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目的:探讨雷帕霉素诱导自噬对肿瘤相关巨噬细胞功能的影响机制及其在膀胱癌进展中的作用。方法:诱导并鉴定肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）,用雷帕霉素诱导TAMs自噬,电镜观察自噬小体数量变化,免疫荧光检测自噬标记物LC3表达。建立TAMs与膀胱癌细胞非接触共培养模型,划痕和Transwell实验观察自噬增强的TAMs对膀胱癌细胞迁移侵袭的影响,western blot检测侵袭相关分子的表达。通过RT-PC
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目的:探讨雷帕霉素诱导自噬对肿瘤相关巨噬细胞功能的影响机制及其在膀胱癌进展中的作用。方法:诱导并鉴定肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）,用雷帕霉素诱导TAMs自噬,电镜观察自噬小体数量变化,免疫荧光检测自噬标记物LC3表达。建立TAMs与膀胱癌细胞非接触共培养模型,划痕和Transwell实验观察自噬增强的TAMs对膀胱癌细胞迁移侵袭的影响,western blot检测侵袭相关分子的表达。通过RT-PCR和ELISA（采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒）检测雷帕霉素干预后TAMs细胞因子的表达变化,免疫荧光检测Nrf2表达。通过si RNA干扰TAMs Nrf2表达,RT-PCR检测相关分子的表达变化。收集临床膀胱癌及对应的癌旁组织,免疫荧光检测TAMs标记物CD206和LC3表达,western blot检测Snail和Slug（Slug/Snail2属于上皮-间质转化（EMT）诱导的参与发育和疾病的转录因子）表达。结果:雷帕霉素处理后,TAMs自噬小体数量和LC3表达增加,且TAMs显著促进膀胱癌细胞的迁移侵袭能力以及Snail和Slug等因子的表达,3-MA（自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤）可抑制雷帕霉素的作用。VEGF（血管内皮生长因子）、IL-10和Mgl1（巨噬细胞表面上的一种已知的M2巨噬细胞标记物MGL1/2-PE）等细胞因子以及转录因子Nrf2的基因和蛋白表达水平在雷帕霉素干预的TAMs中均明显增加,并可被3-MA部分抑制。除此之外,Si Nrf2（核因子类红细胞2相关因子2（Nrf2）小干扰RNA）可抑制TAMs细胞因子的表达。膀胱癌组织CD206和LC3表达均明显增加,大部分CD206阳性细胞的LC3表达增加,可促进膀胱癌细胞Snail和Slug等间质样因子的表达。结论:雷帕霉素诱导自噬通过Nrf2增强TAMs功能,从而促进膀胱癌进展。
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