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重症肌无力(Myasthenia gravis，MG)是一种以神经肌肉接头(theneuromuscular iunction，NMJ)传递障碍为特征的自身免疫性疾病。80—85％的MG患者的血清中可检测到抗乙酰胆碱受体的抗体(the nicotinicacetylcholine receptor antibody，AChRAb)。很多体外或被动免疫的动物模型的研究显示这些抗体通过增加突触后膜乙酰胆碱受体(human acetylcholinereceptor，AChR)的降解率，诱导突触后膜的补体介导损伤，或通过阻断AChR的功能来减少功能性AChR的数量。重症肌无力危象(Myasthenia crisis,MC)是MG的一种常见的威胁生命的并发症，出现在大约15—20％的MG患者中，可以引起呼吸衰竭，需要进行机械通气治疗。将免疫球蛋白(immune globulin，Ig)的可变区进行克隆可以获得可变区Fv (variable fragment)片段，这种分子两条链间由于缺乏共价键或二硫键很容易解离。在VH和VL之间连上一条连接链就会产生单链抗体(singlechain variable fragment，scFv)片段，这种片段在自然界中是不存在的，比Fv更稳定，具备了抗体的特异性和折叠性，且免疫原性较低(它们具有人源性，分子较小)，也比较容易在其基因上贴上标签加以修饰。scFv已经用作治疗肿瘤和HⅣ。胞内蛋白的错误折叠和积累产生了很多种神经变性性疾病，它们可成为有用的胞内抗体攻击目标。关于亨廷顿病的研究已经使用了胞内抗体技术，抗共核蛋白和β-淀粉样蛋白的胞内抗体研究也正处于早期阶段。对于其他几种神经变性疾病包括帕金森病，阿尔茨海默病和朊病毒病的研究为胞内抗体抗特异性目标或可能性的下游目标提供了新颖的治疗方法。抗AChR的主要免疫原区(the main immunogenic region，MIR)的单价抗体能保护AChR免受MG血清中的自身抗体引起的损伤。希腊巴斯德研究所构建并纯化了功能性的scFv 192和195片段。这些片段对人AChR呈现出很高的亲和力(K_D＝0．6nM和0．8 nM)，比早期构建的scFv198(K_D＝80nM)高两个数量级。scFv192几乎可以完全保护人AChR不与完整的抗MIR的mAb(monoclonal antibody,mAb)结合；scFv192也能有效保护74—84％的人AChR免于MG血清中自身抗体的结合，这两种scFv在合适的基因修饰后可能成为保护MG患者体内AChR的强有力的候选试剂。但是，他们在表达这些scFv时使用的表达载体为质粒pHEN1，这是一种噬菌体颗粒，其表达量较低，为了日后在分子水平治疗MG，应该获得较大量表达。在以往研究的基础上，本研究拟采用大肠杆菌表达Trx融合蛋白的方式来表达大鼠scFv1929#，以期得到较大量的可溶性表达产物，主要结果如下：用聚合酶链反应(PCR)扩增scFv1929#基因，将PCR产物再定向克隆至载体pET32a(+)的多克隆位点中，构建了表达载体pET32a(+)-scFv1929#,经PCR及酶切鉴定正确，片段大小为730 bp,与预期的730 bp接近，经测序反应确定无误。所构建质粒pET32a(+)-scFv1929#转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株内，对转化菌株进行2种不同温度和IPTG浓度诱导后，裂菌，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，并用蛋白质印迹技术(Western Blot,WB)进行鉴定。结果显示目的蛋白获得高效表达，表达的蛋白质相对分子质量为44 KD，虽然大部分目的蛋白仍是以包涵体形式出现，但上清中的可溶性蛋白量也较大，可直接用于纯化，且转换温度和IPTG浓度对可溶性表达影响不大。经WB证明经大肠杆菌表达的融合蛋白scFv1929#具有较高的特异性。综上所述，本研究成功构建了scFv1929#高效原核表达系统，虽然大部分目的蛋白仍是以包涵体形式出现，但上清中的可溶性蛋白量也较大，可直接用于纯化，且具有良好的特异性。