光诱导基因MdBBX21促进苹果果皮花青苷合成机制研究

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苹果(Malus domestica Borkh.)果皮的色泽对其营养价值和经济价值具有十分重要的影响。果皮的红色是由花青苷的含量和种类决定的,光照是花青苷合成过程不可或缺的环境因素。在光照条件下,苹果果皮中花青苷含量积累,与花青苷合成相关的基因表达量上调,然而光诱导上述基因的表达机制仍然不够清楚。本研究以红色苹果品种‘新红星’为材料,对光诱导果皮着色过程进行分析,寻找出差异表达的基因并对基因表达模式和功能进行分析,进一步阐明光信号传递机制在果皮花青苷合成中的作用,促进光诱导果实着色的分子机理的理解,为果实品质改良提供理论依据。本研究获得的主要结果如下:1.取白光照射后0 h(G0)、6 h(G6)、24 h(G24)的果皮进行高通量测序,将差异基因的表达量相对G0进行归一化,结果显示4082个差异基因被归类到两个显著上调模式(profile6和profile7)和一个显著下调模式(profile0)中。对上调模式和下调模式的差异基因进行KEGG富集分析,结果显示在上调模式中类黄酮生物合成(Flavonoid biosynthesis)和苯丙烷生物合成(Phenylpropanoid biosynthesis)相关基因显著富集。2.在显著上调模式profile6中鉴定了一个差异表达的基因MD08G1021000,将其命名为Md BBX21。基因表达分析结果表明,在‘新红星’果皮中Md BBX21表达量在光照3 h开始上调,并在9 h达到高峰,其表达量变化早于花青苷合成相关的结构基因和表达基因,说明Md BBX21能够快速受光诱导,可能在花青苷合成相关基因的上游发挥作用。3.对Md BBX21进行亚细胞定位分析,结果表明Md BBX21定位在细胞核中。在拟南芥上异源表达Md BBX21,转基因过表达拟南芥下胚轴和子叶中花青苷积累量增加,说明Md BBX21能够促进花青苷的生物合成。4.酵母双杂交和双分子荧光互补(Bi FC)试验证明Md BBX21与Md HY5分别在酵母细胞和活体植物细胞内互作。5.利用双荧光素酶系统检测Md BBX21对Md MYB10启动子的作用。结果显示,Md BBX21能够提高Md MYB10启动子的转录活性,但Md BBX21-p Green II 62-SK与Md HY5-p Green II 62-SK以及Pro MYB10-LUC质粒混合瞬时转化烟草叶片时,荧光素酶活性显著提高,说明Md BBX21能够与Md HY5蛋白互作后共同提高Md MYB10启动子的转录活性。
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