论文部分内容阅读
目的探究电针“关元”“中极”“三阴交”“会阳”对慢性盆腔痛综合征(Chronic Pelvic Pain Syndrome,CPPS)大鼠的镇痛作用,从前列腺转录组水平阐明电针干预对CPPS的可能镇痛机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只,大鼠前列腺两侧腹叶注射完全弗氏佐剂50 μL制备CPPS模型,假手术组注射同等剂量生理盐水。于造模后14d,电针组“关元”“中极”“三阴交”直刺3mm,“会阳”向内朝脊柱方向斜刺6 mm,频率2 Hz/100 Hz,电流强度以鼠尾稍微摆动而无明显挣扎为宜。先电针正面20 min,后电针背面20 min,每日1次,每次40 min,5日一疗程,4个疗程,疗程间隔2d。进行以下研究:(1)电针干预对CPPS大鼠疼痛症状的影响。分别于造模后7、14 d及每个疗程后,测量各组大鼠后足机械痛阈,观察各组大鼠在不同时间点的机械痛阈变化,探究电针对CPPS大鼠的镇痛作用。(2)电针干预对CPPS大鼠体重、前列腺湿重及前列腺指数影响。实验结束后,取材之前称量各组大鼠体重;断颈处死后,取各组大鼠前列腺,称量湿重;计算前列腺指数。(3)电针干预对CPPS大鼠前列腺组织结构的影响。实验结束后,采用HE染色法观察前列腺组织形态结构,为电针对CPPS的镇痛作用提供形态学依据。(4)电针干预对CPPS大鼠前列腺疼痛相关因子COX-2、PGE2、β-EP表达的影响。实验结束后,采用ELISA法检测前列腺COX-2、PGE2、β-EP表达,从分子水平探究电针对CPPS的镇痛作用。(5)利用RNA-Seq技术探究电针干预对CPPS大鼠前列腺基因表达的影响。实验结束后,利用RNA-Seq技术对假手术组、模型组、电针组大鼠前列腺基因进行测序,并进行GO功能和KEGG通路富集分析,初步阐明电针干预对CPPS镇痛作用的可能信号通路。(6)探究电针对CPPS大鼠前列腺的调控机制。结合实验二前列腺高通量测序结果中差异表达显著的基因及信号通路的现代研究进展,筛选出与炎症疼痛密切相关的信号通路上的关键基因TRPV1、PLC、PKC、cAMP、PKA,并应用qRT-PCR技术进行验证,进一步阐明电针对CPPS大鼠镇痛作用的前列腺调控机制。结果(1)各组大鼠机械痛阈结果。与同时点假手术组相比,模型组机械痛阈显著下降(P<0.01)。模型组、电针组的造模后7d与造模后14d两个时间点比较,机械痛阈差异无统计学意义(P>0.05),均呈下降趋势。给予电针干预后,与同时点模型组比较,电针组第三、第四疗程后的机械痛阈明显升高(P<0.01),且呈逐渐升高的趋势。(2)各组大鼠体重、前列腺湿重及前列腺指数结果。各组大鼠体重差异无统计学意义。与假手术组相比,模型组前列腺湿重、前列腺指数明显升高(P<0.01)。与模型组相比,电针组前列腺湿重、前列腺指数明显降低(P<0.01)。(3)各组大鼠前列腺组织结构HE染色结果。假手术组大鼠的前列腺结构完整无损,腔内充满均匀分布的粉红色分泌物,腺腔和间质内没有炎症细胞浸润。模型组大鼠前列腺上皮乳头状增生,腺腔狭窄,腔内粉红色分泌物减少,腺腔和间质内有大量炎症细胞浸润。电针组腺腔结构基本完整,腺腔和间质内偶见炎症细胞浸润,腔内分布较多粉红色分泌物,病理变化明显改善。(4)各组大鼠前列腺COX-2、PGE2、β-EP表达结果。与假手术组相比,模型组COX-2、PGE2表达明显升高,β-EP表达明显降低(P<0.01)。与模型组相比,电针组COX-2、PGE2表达明显降低、β-EP表达明显升高(P<0.01)。(5)大鼠前列腺高通量测序结果。Pmodel/sham有1994个(pvalue<0.05),其中上调1794个,下调200个。PEA/model有499个(pvalue<0.05),其中上调262个,下调 237 个。Pmodel/sham∩ PEA/model 有 147 个(pvalue<0.05),其中,Pmodel/sham 的上调基因与Pmodel/EA的上调基因之间的重叠基因有103个,Pmodel/sham的下调基因与Pmodel/EA的下调基因之间的重叠基因有37个。GO功能分析结果中,Pmodel/sham∩ PEA/model参与的GO功能具有交集,其中生物学过程主要包括免疫反应、炎症反应;构成的细胞组分包括质膜、细胞器膜等膜类表面;实现的分子功能包括细胞因子活性、趋化因子活性等炎症、免疫相关功能。KEGG富集分析结果中,Pmodel/sham∩ PEA/model参与的信号通路具有交集,主要包括cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号通路、NF-κB信号通路及B细胞受体信号通路、趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用等免疫相关的通路;包括免疫、炎症相关的疾病,如类风湿性关节炎、原发性免疫缺陷疾病、金黄色葡萄球菌感染等。(6)各组大鼠前列腺qRT-PCR结果。与假手术组比较,模型组大鼠前列腺TRPV1、PLC、PKC、cAMP、PKA均上调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,电针组TRPV1、PLC、PKC、cAMP、PKA均下调,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论(1)电针“关元”“中极”“会阳”“三阴交”对CPPS具有较好的镇痛作用。(2)电针干预对CPPS的镇痛作用可能是通过调控cAMP-PKA-TRPV1/PLC-PKC-TRPV1信号通路实现。