杨树延伸因子复合体成员ELP和KTI12基因的功能研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:papaya007
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真核生物转录延伸因子复合体(elongator complex,or ELP complex)最初是在研究酵母RNA聚合酶II(Pol II)相关转录因子时发现的,越来越多的证据说明它的主要细胞功能是在tRNA摆动碱基的修饰。转录延伸因子复合体由六个高度保守的亚基ELP1-6构成,并且参与到多种不同的细胞活动当中,比如:组蛋白乙酰化、细胞外分泌、α-微管蛋白末端乙酰化、对DNA损伤试剂敏感和转录沉默以及tRNA修饰。转录延伸因子复合体ELP及附属蛋白KTI12均参与了tRNA第34位尿嘧啶上的修饰(mcm~5s~2U、ncm~5U、ncm~5s~2U和mcm~5U)。在对延伸因子复合体在植物中的研究表明,ELP在参与调控细胞分化,在非生物胁迫的耐受性,植物对ABA的响应,并且与生长素,水杨酸的信号途径都有着重要功能。目前,国际上对转录延伸因子复合体的研究主要集中在微生物中,对于植物的研究只停留在草本植物中,因此本课题对于杨树转录延伸因子复合体的研究可以填补国际上对高等植物转录延伸因子复合体功能研究的空白。本课题通过酵母的ELP复合体基因序列,通过Blast找到杨树的同源基因,构建了转录延伸因子复合体ELP及附属蛋白KTI12的RNAi和部分超表达载体,将载体通过农杆菌侵染法转入717杨(P.tremula x P.alba 717-1B4 genotype)中,对杨树ELP及KTI基因进行功能分析。本文的主要结论如下:1.通过生物信息学分析,我们发现在杨树,水稻,玉米以及拟南芥等高等植物中ELP1-6及KTI12的蛋白序列非常保守,尤其是ELP1,2,3这三个亚基,这些高等植物的ELP蛋白中存在着相同的功能域。这说明这些亚基在不同物种间可能存在着相似的蛋白结构和功能。2.通过酵母ELP1-6和KTI12基因序列找到杨树同源基因PtELP和PtKTI12,并构建RNAi和超表达载体,其中PtELP1、2、4、5、6 RNAi以及PtKTI12 RNAi载体以构建完成并侵染杨树获得了阳性苗,此外PtELP3,PtELP1,2,3 Triple RNAi以及PtELP4,ELP5,ELP6超表达载体已经构建好并转化农杆菌和进行了杨树侵染,现正处于组培筛选阶段,暂未获得阳性苗。3.本文重点对PtKTI12A&B转基因植株进行了功能分析,PtKTI12A RNAi转基因杨树在幼苗生长及离体叶片脱水速率方面与野生型717杨相比没有明显的区别,PtKTI12B RNAi转基因杨树则在组培瓶生长明显比野生型缓慢。通过对PtKTI12 RNAi转基因杨树进行核苷修饰分析发现,PtKTI12A或PtKTI12B RNAi转基因杨树的ncm~5U核苷修饰水平下降了25%左右。说明KTI12基因和ELP基因一样,在杨树中参与了ncm~5U修饰过程,并且基因的下调影响到杨树生长。
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