论文部分内容阅读
目的:本研究选取非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者手术或病灶活检获得的肿瘤组织，提取其DNA，对BRAF（V-rafmurine sarcoma viraloncogene homologB1鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1）基因的15外显子进行聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）扩增，获取到相关目的基因的对应基因序列。利用直接测序的方法分析扩增的基因序列，然后对产生的结果进行详细分析，在此基础上，与人类基因组库的基因做比对，找出目的基因突变点的存在。本研究探索了BRAF基因在非小细胞肺癌患者肿瘤组织的突变率；为可能用于非小细胞肺癌分子靶向治疗的新靶点提供实验数据；探索为避免使用EGFR-TKIs治疗非小细胞肺癌出现耐药，服药前应是否联合检测BRAF基因的必要性；分析BRAF基因突变与非小细胞肺癌患者的性别、年龄、病理类型、TNM分期、分化程度、吸烟与否等临床特征的统计学关系；为临床上实现个体化治疗非小细胞肺癌提供了新思路。方法:1)收集2011.3-2012.6年经病理诊断为非小细胞肺癌患者的手术或病灶活检获得的肿瘤组织190例，整理患者的临床指标，包括性别、年龄、病理类型、分化程度、TNM分期、吸烟与否等。2)提取样本肿瘤组织中的DNA，通过聚合酶链式反应（PCR）技术和基因直接测序法检测190例非小细胞肺癌肿瘤组织中BRAF基因突变的情况。3)运用统计软件SPSS17.0进行处理，分析BRAF基因突变与患者临床病理特征间的统计学意义。结果:1) BRAF基因的突变检测结果在190例样本中，共有10例发生BRAF基因突变（10/190；5.26%），均为15外显子上V600E突变型(c．1799T＞A)。其中男性组突变3例（3/122；2.52%），女性组突变7例（7/68；11.5%）；年龄>65岁组突变4例（4/65；6.15%），年龄≤65岁组突变6例（6/125；4.80%）；腺癌组突变8例（8/86；9.30%），鳞癌组突变2例（2/67；2.98%），大细胞肺癌组突变0例，腺鳞癌组突变0例；低分化组突变7例（7/70;11.11%），中-高分化组突变3例(3/120;2.56%)； I~II期突变3例(3/55;5.54%)，III~IV期突变7例(7/135;5.19%)；吸烟患者组3例(3/116;2.58%)，不吸烟患者组7例(7/74,10.45%)。2) BRAF基因突变同患者临床特征之间的关系肿瘤组织中BRAF基因突变在女性组高于男性组（11.5%vs2.52%，p <0.05），在非吸烟组中高于吸烟组（10.45%vs2.58%，p <0.05），低分化组高于中高分化组（11.11%vs2.56%，p <0.05），有统计学意义；而BRAF基因突变在年龄>65岁组和≤65岁组突变分别为6.15%和4.80%（p>0.05），在病理类型组中，腺癌9.30%、鳞癌2.98%、腺鳞癌、大细胞癌均为0（p>0.05），I~II期和III~IV期（5.54%vs5.19%，p>0.05），均无统计学意义。结论：（1）在非小细胞肺癌患者的肿瘤组织中BRAF基因突变表达率为5.26%，较国外文献报道略高，与国内文献报道基本一致，推测亚裔人群突变较欧美人群高。本研究可为非小细胞肺癌的分子靶向治疗寻找潜在新靶点提供实验数据；提示在使用EGFR-TKIs治疗非小细胞肺癌前联合检测BRAF基因的必要性。（2）在本研究中BRAF基因突变在女性的表达高于男性，不吸烟患者中表达高于吸烟患者，低分化患者表达高于中-高分化患者，提示BRAF基因突变可能与患者的性别、分化程度、以及生活习惯相关；而与患者的病理类型、临床TNM分期以及年龄无关。