【摘 要】
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研究背景:特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）是一种常见的慢性炎症性皮肤病,发病与遗传易感性、环境、免疫、微生物等相关。AD患者可出现微生物稳态失衡,目前,有关葡萄球菌、马拉色菌等研究较多,而白色念珠菌则相对较少。白色念珠菌以孢子相定植于正常皮肤或黏膜表面,当其转换为致病性的菌丝相后,会继发感染,引发机体产生一系列变化。表皮主要由基底层的角质形成细胞通过增殖分化形成,在此过程中产
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研究背景:特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）是一种常见的慢性炎症性皮肤病,发病与遗传易感性、环境、免疫、微生物等相关。AD患者可出现微生物稳态失衡,目前,有关葡萄球菌、马拉色菌等研究较多,而白色念珠菌则相对较少。白色念珠菌以孢子相定植于正常皮肤或黏膜表面,当其转换为致病性的菌丝相后,会继发感染,引发机体产生一系列变化。表皮主要由基底层的角质形成细胞通过增殖分化形成,在此过程中产生各种分化相关蛋白,包括丝聚蛋白（filaggrin,FLG）、角蛋白10（keratin 10,KRT10）、内披蛋白（involucrin,IVL）、兜甲蛋白（loricrin,LOR）等,各蛋白不仅构成了角化包膜（Cornified envelope,CE）的主要成分,也共同表达在表皮分化复合体（Epidermal differentiation complex,EDC）上。在 AD 中,各种微生物及其代谢产物可以通过芳烃受体-相似转录抑制因子1（Aryl Hydrocarbon Receptor-Ovo like transcriptional repressor 1,AHR-OVOL1）轴调控表皮蛋白,影响表皮细胞增殖分化。本实验初步研究不同菌相下白色念珠菌对于AD角质形成细胞模型的作用。实验方法:1、构建AD角质形成细胞模型,观察AD角质形成细胞模型与白色念珠菌共培养的浓度和时间依赖关系。2、构建AD角质形成细胞模型,分别添加不同菌相的白色念珠菌共培养。通过mRNA测序,分析不同菌相白色念珠菌感染AD角质形成细胞模型后,角质形成细胞基因的差异表达。测定FLG、KRT10、IVL、OVOL1的表达及白介素-6、白介素-8（Interleukin-6、Interleukin-8,IL-6、IL-8）的分泌。3、构建AD角质形成细胞模型,拮抗AHR后,分别添加不同菌相的白色念珠菌共培养,测定FLG、KRT10、IVL、OVOL1的变化。结果:1、AD角质形成细胞模型与不同菌相白色念珠菌共培养1:4,8小时符合实验要求。2、AD角质形成细胞模型,添加不同菌相的白色念珠菌后,FLG、IVL、OVOL1表达量升高,孢子相升高更明显;IL-6、IL-8分泌量增加,菌丝相增加更明显（P＜0.01）;测序发现OVOL1在不同菌相白色念珠菌感染AD模型中表达有差异。3、AD角质形成细胞模型,拮抗AHR后,添加不同菌相的白色念珠菌,FLG、IVL表达量升高,菌丝相升高更明显。OVOL1基因表达降低,孢子相中FLG变化趋势同OVOL1,菌丝相中IVL变化趋势同OVOL1,KRT10基本不表达。结论:1、不同菌相白色念珠菌感染AD角质形成细胞模型后,不同菌相均促进表皮增殖分化,但可能作用层次不同,且菌丝相更能加重炎症进展。2、AHR-OVOL1轴在不同菌相白色念珠菌感染AD角质形成细胞模型中起作用。在孢子相白色念珠菌感染AD角质形成细胞模型中,AHR-OVOL1轴促进FLG表达,在菌丝相白色念珠菌感染AD角质形成细胞模型中,AHR-OVOL1轴促进IVL表达。
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