第一章Beclin1乙酰化突变位点K414R与脂肪细胞分化和脂解有关目的:探讨Beclin1乙酰化突变位点K414R对脂肪细胞分化和脂解的影响。方法:健康雄性4周龄的C57BL/6小鼠随机分为对照组和高脂喂养组,经过3个月连续喂养至高脂组小鼠体重≥50g,小鼠被脱颈椎处死,留取皮下脂肪及内脏脂肪;体外实验将3T3-L1前脂肪细胞诱导为成熟脂肪细胞;构建了 Beclin1乙酰化K414R突变慢病毒质粒;免疫沉淀法检测Beclin1乙酰化水平;免疫荧光下观察LC3-GFP的点状聚集;透射电镜下观察自噬体;通过试剂盒检测游离脂肪酸、甘油含量;ELISA法检测leptin和adiponectin的表达;油红O染色法检测脂肪细胞分化水平;Realtime PCR法检测Beclin1基因表达;免疫印迹法检测与自噬（Beclin1和LC3）、脂肪细胞分化（CEBPα、ap2 和 PPARy）和脂解（FAS,HSL,ATGL 和 perilipin）相关基因的蛋白变化。结果:高脂喂养小鼠皮下和内脏脂肪组织中Beclin1乙酰化水平升高;3T3-L1脂肪细胞在分化过程中、异丙肾上腺素/TNFα刺激下、去乙酰化酶NAM（nicotinamide）和TSA（trichostatin A）处理下可增加Beclin1乙酰化和LC3表达的水平;Beclin1乙酰化K414R位点的突变影响了 Beclin1蛋白的稳定性;透射电镜显示K414R突变导致成熟脂肪细胞中自噬体显著减少;K414R突变降低了脂肪细胞分化相关蛋白PPARγ、ap2和CEBPα的表达;K414R突变降低了 leptin的表达水平,增加了 adiponectin的分泌;K414R突变增加了 FAS和perilipin的表达,降低了脂溶酶HSL、p-HSL和ATGL的表达。结论:成熟脂肪细胞中存在Beclin1的乙酰化表达;新的乙酰化位点K414被鉴定出来;Beclin1的乙酰化参与了脂肪细胞的分化和脂解过程,并且K414R位点的突变抑制了脂肪细胞的分化和脂解。第二章 Beclin1乙酰化突变位点K414R通过抑制过度激活的自噬减轻糖尿病肾病早期高糖诱导的足细胞损伤目的:探讨自噬在高糖所致早期肾损伤中的角色,及Beclin1乙酰化突变位点K414R在糖尿病肾病早期高糖诱导的足细胞损伤中的作用。方法:健康雄性6周龄（体重180±20g）Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组和糖尿病肾病组。糖尿病肾病组通过单次55 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素诱导,并喂食高脂高糖饮食（对照组接受等量的溶媒并喂食普通饮食）,诱导7天后,测量血糖水平以确认糖尿病的发病,此计为第0周。然后,在第0周和第4周,检测生化指标并收集肾皮质组织。体外培养MPC5足细胞。将Beclin1（K414R）-pLVX-ZsGreen1-N1（野生型或突变型）慢病毒质粒转染足细胞。用Western-blot或免疫沉淀法分别检测蛋白质或乙酰化水平,用免疫组织化学方法分析足细胞的形态学变化。免疫荧光法检测LC3斑点的聚集。结果:高糖诱导下,随着作用时间的延长足细胞损伤不断加重;在24小时,足细胞自噬水平明显升高同时伴有Beclin1的乙酰化水平上调;Beclin1乙酰化突变位点K414R可抑制过度激活的自噬,从而改善足细胞损伤。结论:Beclin1乙酰化位点K414是一个关键的分子和药物靶点,在糖脂代谢紊乱及基于此的糖尿病及其并发症的研究中具有深远的影响。