【摘 要】
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目的:运用血府逐瘀胶囊干预血瘀模型大鼠,分析血府逐瘀胶囊对机体血流和组织血管新生的影响,检测血流速应答基因KLF2和KLF4及其下游血管新生关键因子（VEGFA/VEGFR2、e NOS）表达变化,综合分析血府逐瘀胶囊的“活血”与“生新脉”效应,了解KLF2/4信号在其中作用。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物常规剂量组和药物高剂量组,每组10只。常规剂量组大鼠给血府逐瘀胶囊剂量为
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目的:运用血府逐瘀胶囊干预血瘀模型大鼠,分析血府逐瘀胶囊对机体血流和组织血管新生的影响,检测血流速应答基因KLF2和KLF4及其下游血管新生关键因子（VEGFA/VEGFR2、e NOS）表达变化,综合分析血府逐瘀胶囊的“活血”与“生新脉”效应,了解KLF2/4信号在其中作用。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物常规剂量组和药物高剂量组,每组10只。常规剂量组大鼠给血府逐瘀胶囊剂量为0.48 g/（kg·d）,高剂量组给血府逐瘀胶囊剂量为0.96 g/（kg·d）,二者给药量均为20 m L/（kg·d）,空白组按20 m L/（kg·d）给予生理盐水,每天2次。（1）血府逐瘀胶囊内容物溶于生理盐水中,药物组大鼠预防性灌胃血府逐瘀胶囊给药11天,空白组和模型组灌胃等量生理盐水。（2）药物组预防性给药11天后,除空白组外大鼠均皮下注射0.1%盐酸肾上腺素注射液结合冰水游泳造模,连续处理3天,制备大鼠血瘀模型。（3）于造模前1和造模第3天,全自动血流变仪检测血液血流变学指标,采用彩色多普勒超声检测下肢股动脉血流速,评价大鼠是否成模。（4）成模后第1天行双侧后肢截肢手术,术后48h取肉芽组织和创面组织。（5）HE染色、免疫组织化学法检测各组大鼠肉芽组织新生血管情况。（6）免疫组织化学法检测各组大鼠肉芽组织中KLF2、KLF4及其下游VEGFA、VEGFR2、e NOS的表达情况,Q-PCR和Western Blot法分别检测各组大鼠创面组织KLF2、KLF4及其下游VEGFA、VEGFR2、e NOS m RNA和蛋白质水平表达。结果:1.大鼠血瘀表征观察结果:预防性给药前及给药期间,各组大鼠进食正常,体重匀速增长,爪、尾色淡红。造模后,相比于空白组,模型组大鼠进食减少,造模前后的体重比值显著下降（P＜0.01）,爪、尾色泽较淡偏紫;相比于模型组,药物组造模前后的体重比值显著上升（P＜0.01）,爪、尾色泽较红。2.大鼠血液流变学和血流速检测结果:与空白组相比,血瘀模型的制备使模型组各项血流变指标明显升高（P＜0.01）,下肢股动脉血流速减慢（P＜0.01）;而相对于模型组,血府逐瘀胶囊的干预明显改善了血流变各项指标（P＜0.01）,提高了下肢股动脉血流速（P＜0.01）。3.血管新生能力的检测结果:（1）肉芽组织HE染色结果显示,与空白组比较,模型组肉芽组织中血管数量明显减少（P＜0.01）;与模型组相比,两个药物组肉芽组织中血管数量都显著增多（P＜0.01）。（2）肉芽组织内皮细胞标志物CD34免疫组织化学检测显示,与空白组比较,模型组CD34表达降低（P＜0.05）;与模型组相比,药物常规剂量组和药物高剂量组CD34表达显著增加（P＜0.05）。4.流速应答转录因子KLF2/4表达的检测结果:肉芽组织免疫组织化学和创面组织Q-PCR、Western Blot结果均显示,相对于空白组,模型组的KLF2/4表达明显上调（P＜0.05）,两个药物组均相对于模型组发生明显下调（P＜0.05）。5.受KLF2/4调节的靶基因VEGFA、VEGFR2以及e NOS的表达情况检测结果:肉芽组织免疫组织化学和创面组织Q-PCR、Western Blot的结果均显示,相对于空白组,模型组VEGFA、VEGFR2、e NOS下调（P＜0.05）,两个药物组的VEGFA、VEGFR2、e NOS表达均相对于模型组发生上调（P＜0.05）。结论:1.对于血瘀模型大鼠,血府逐瘀胶囊具有改善血流变指标,提高血流速,促血管新生的“活血生新脉”作用。2.血流速应答因子KLF2/4的表达在血府逐瘀胶囊促血瘀模型大鼠“活血生新脉”过程中受抑制,二者具有相关性。3.KLF2/4可能通过调节VEGFA/VEGFR2、e NOS等促血管新生关键信号分子表达,参与血府逐瘀胶囊促进血瘀大鼠“活血生新脉”的作用。
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