噬菌体抗体库技术是继单克隆抗体制备技术后具有换代地位的抗体制备技术，在功能蛋白的表达、疾病诊断和治疗等领域得到了广泛研究，用在农兽药等小分子抗体的制备上也获得了亲和力较高的抗体。因其筛选通量高、试验周期短、效率高、特异性强及亲和选择范围广等特点在农药抗体制备和检测技术发展等方面具有广泛的应用前景。本研究构建了小分子米尔比霉素肟化物噬菌体抗体库，以期建立十六元大环内酯类化合物的特异性抗体库，为相关药物的检测和筛选奠定基础。1．人工抗原的合成及免疫：将设计合成的米尔比霉素肟化物半抗原(MILO-5-琥珀酰半酯)利用碳化二亚胺法与牛血清白蛋白(BSA)偶联形成人工抗原，免疫Balb/c小鼠，其抗血清效价最高可达1：25600，建立的CI-ELISA检测范围抑制率在20％-70％。2．抗体可变区基因的获得及目的基因的构建：取抗血清效价较高的小鼠脾脏提取总RNA，RT-PCR分别扩增得到抗体重链可变区基因(V_H)和轻链可变区基因(V_L)，大小分别为360bp和340bp左右；纯化回收的V_H与V_L基因在接近等摩尔的浓度下，首先采用含有Linker接头片段的引物利用重叠延伸PCR法(SOE-PCR)，将V_H与V_L基因片段拼接起来，再用带有限制性内切酶位点的引物扩增出单链抗体(ScFv)基因片段，获得大小约750bp的目的片段。3．ScFv噬菌体抗体库的构建：ScFv基因纯化后经SfiI和NotI双酶切，与同样经过双酶切的载体pCANTAB5E连接，化学法转化大肠杆菌TG1感受态细胞，提取质粒经PCR初步鉴定，进一步测序证明有外源片段插入且与目的片段一致。转化菌经辅助噬菌体M13K07超感染后，收集上清，得到库容量为2.4×10~6p.f.u/mL的噬菌体抗体库。为下一步抗体库筛选技术的建立和抗体的筛选奠定了基础。