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研究背景及目的:
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,并且肺癌的生存率非常低,而且肺癌的预后非常差。在我国,肺癌发病率目前仍高居新发恶性肿瘤首列,肺癌也是恶性肿瘤死亡的主要原因。肺癌主要分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC),NSCLC根据病理组织学分类,又可以分为肺腺癌(LUAD)、肺鳞癌和大细胞肺癌等等。LUAD的预后与其疾病的发生发展以及TNM分期有着密不可分的关系,研究表明LUAD分期越早其预后越好,五年生存率越高。为了提高LUAD生存率,开展LUAD的早期筛查和早期诊断是非常重要的。
21世纪之前,肺癌主要依靠X线及螺旋CT进行筛查,但是这种方式不仅价格昂贵,而且经过重复检测,也会对人体产生辐射等副作用,后来研究人员发现通过体液检测也可以对肺癌进行筛查。目前在肺癌中最常用的体液检测是通过检测血清中的肿瘤标志物,比如癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(SYFRA 21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)等,目前,肿瘤标志物在临床中被广泛应用,但是这些标志物不仅仅存在于LUAD中,在其他癌症中也有表达,缺乏特异性。当前研究表明长链非编码RNA(LncRNAs)在肺癌的发生、发展、转移中发挥了重大的作用。LncRNAs是一种长度超过200个核苷酸且不编码蛋白质的RNA。LncRNAs除了可以在转录后水平上调节基因表达,还可以在转录、表观遗传水平上调节基因表达。
本课题组前期研究中发现了一种LncRNA—LINC01426,它不仅在LUAD组织中高表达,而且发现其与LUAD患者预后相关。通过对LINC01426进行功能和机制实验探究,发现LINC01426具有成为一种新型肿瘤标志物的潜能。课题组前期实验是在组织标本的基础上实施的,但是由于获取标本组织的方式具有侵入性和创伤性,且考虑到肿瘤标志物应用于临床时需要进行反复检测,以达到评估疾病发生发展的目的,所以为了避免这些弊端,需要研究血清中肿瘤标记物的表达情况。因此本实验主要研究LUAD患者血清中LINC01426的表达情况,并分析LUAD患者血清中的LINC01426在不同的临床因素分组中是否具有差异性表达,最后评估LINC01426在LUAD的筛查中是否具有临床诊断参考意义。
研究方法:
在本实验中,共收集了于山东省立医院初次就诊的25例LUAD患者的血清标本以及同期于山东省立医院体检中心体检的健康人群中随机抽取的17例血清标本,最后收集并记录收集标本的临床数据信息。其中LUAD患者的TNM分期是按照AJCC第八版制定的肺癌分期标准确定的。
在实验中,首先对收集的血清标本进行总RNA提取,然后将上一步骤中提取到的总RNA进行反转录从而得到cDNA,最后应用qRT-PCR方法检测血清中LINC01426的相对表达量。在进行数据分析时,应用SPSS26.0对实验数据进行统计学分析以及应用SPSS26.0及GraphpadPrism9.0绘制图像。进行实验数据分析时首先对实验数据进行正态性检验,由于本实验中样本量n<30,所以选择夏皮洛-威尔克进行正态性检验分析,于此同时应用比较直观的检验方法检测数据是否符合正态分布,例如:直方图、P-P图等。数据符合正态分布的,进行统计学分析时应用独立样本t检验;不符合正态分布的则是应用非参数检验中的2个独立样本进行数据分析。
在本实验中,健康组以及LUAD组患者血清中LINC01426的相对表达量是呈正态分布的,所以在分析LUAD患者对比健康人血清中LINC01426的相对表达情况时采用独立样本t检验;然后将LUAD患者根据不同的临床因素进行分组,分析不同亚组的血清中LINC01426的相对表达与其临床因素的关系时,因为不是所有的亚组都符合正态分布,所以在进行统计学分析时选择了非参数检验中的2个独立样本进行检验,即曼-惠特尼检验。最后绘制LUAD血清中LINC01426的ROC曲线,计算AUC,评估LINC01426是否对LUAD的临床诊断具有参考意义。
研究结果:
1.健康组以及LUAD组患者血清中LINC01426的相对表达量的实验数据呈正态分布;
2.LUAD患者血清中LINC01426呈高表达,P<0.05;
3.LUAD患者血清中的LINC01426在有无淋巴结转移以及患者TNM分期情况中有差异性表达,P<0.05,淋巴结发生转移的、TNM分期晚的LUAD患者血清中LINC01426的相对表达量高于没淋巴结发生转移、分期早的;而LUAD患者血清中的LINC01426的相对表达情况与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤的分化程度以及患者是否吸烟、是否有远处转移的情况中没有差异表达,P>0.05。
4.LUAD患者血清中LINC01426的ROC曲线分析结果显示:AUC为0.689(95%CI:0.529~0.850),P<0.05,当取约登指数最大临界值0.464时,其特异度和敏感度分别是0.824和0.640,认为LINC01426在LUAD的临床诊断中具有参考意义。
研究结论:
1.LINC01426在LUAD患者的血清中高表达;
2.淋巴结发生转移以及TNM分期较晚的LUAD患者血清中的LINC01426相比没有发生淋巴结转移的患者以及分期较早的患者具有高表达的特征。
3.血清中LINC01426在LUAD的临床诊断中具有参考意义。
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,并且肺癌的生存率非常低,而且肺癌的预后非常差。在我国,肺癌发病率目前仍高居新发恶性肿瘤首列,肺癌也是恶性肿瘤死亡的主要原因。肺癌主要分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC),NSCLC根据病理组织学分类,又可以分为肺腺癌(LUAD)、肺鳞癌和大细胞肺癌等等。LUAD的预后与其疾病的发生发展以及TNM分期有着密不可分的关系,研究表明LUAD分期越早其预后越好,五年生存率越高。为了提高LUAD生存率,开展LUAD的早期筛查和早期诊断是非常重要的。
21世纪之前,肺癌主要依靠X线及螺旋CT进行筛查,但是这种方式不仅价格昂贵,而且经过重复检测,也会对人体产生辐射等副作用,后来研究人员发现通过体液检测也可以对肺癌进行筛查。目前在肺癌中最常用的体液检测是通过检测血清中的肿瘤标志物,比如癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(SYFRA 21-1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)等,目前,肿瘤标志物在临床中被广泛应用,但是这些标志物不仅仅存在于LUAD中,在其他癌症中也有表达,缺乏特异性。当前研究表明长链非编码RNA(LncRNAs)在肺癌的发生、发展、转移中发挥了重大的作用。LncRNAs是一种长度超过200个核苷酸且不编码蛋白质的RNA。LncRNAs除了可以在转录后水平上调节基因表达,还可以在转录、表观遗传水平上调节基因表达。
本课题组前期研究中发现了一种LncRNA—LINC01426,它不仅在LUAD组织中高表达,而且发现其与LUAD患者预后相关。通过对LINC01426进行功能和机制实验探究,发现LINC01426具有成为一种新型肿瘤标志物的潜能。课题组前期实验是在组织标本的基础上实施的,但是由于获取标本组织的方式具有侵入性和创伤性,且考虑到肿瘤标志物应用于临床时需要进行反复检测,以达到评估疾病发生发展的目的,所以为了避免这些弊端,需要研究血清中肿瘤标记物的表达情况。因此本实验主要研究LUAD患者血清中LINC01426的表达情况,并分析LUAD患者血清中的LINC01426在不同的临床因素分组中是否具有差异性表达,最后评估LINC01426在LUAD的筛查中是否具有临床诊断参考意义。
研究方法:
在本实验中,共收集了于山东省立医院初次就诊的25例LUAD患者的血清标本以及同期于山东省立医院体检中心体检的健康人群中随机抽取的17例血清标本,最后收集并记录收集标本的临床数据信息。其中LUAD患者的TNM分期是按照AJCC第八版制定的肺癌分期标准确定的。
在实验中,首先对收集的血清标本进行总RNA提取,然后将上一步骤中提取到的总RNA进行反转录从而得到cDNA,最后应用qRT-PCR方法检测血清中LINC01426的相对表达量。在进行数据分析时,应用SPSS26.0对实验数据进行统计学分析以及应用SPSS26.0及GraphpadPrism9.0绘制图像。进行实验数据分析时首先对实验数据进行正态性检验,由于本实验中样本量n<30,所以选择夏皮洛-威尔克进行正态性检验分析,于此同时应用比较直观的检验方法检测数据是否符合正态分布,例如:直方图、P-P图等。数据符合正态分布的,进行统计学分析时应用独立样本t检验;不符合正态分布的则是应用非参数检验中的2个独立样本进行数据分析。
在本实验中,健康组以及LUAD组患者血清中LINC01426的相对表达量是呈正态分布的,所以在分析LUAD患者对比健康人血清中LINC01426的相对表达情况时采用独立样本t检验;然后将LUAD患者根据不同的临床因素进行分组,分析不同亚组的血清中LINC01426的相对表达与其临床因素的关系时,因为不是所有的亚组都符合正态分布,所以在进行统计学分析时选择了非参数检验中的2个独立样本进行检验,即曼-惠特尼检验。最后绘制LUAD血清中LINC01426的ROC曲线,计算AUC,评估LINC01426是否对LUAD的临床诊断具有参考意义。
研究结果:
1.健康组以及LUAD组患者血清中LINC01426的相对表达量的实验数据呈正态分布;
2.LUAD患者血清中LINC01426呈高表达,P<0.05;
3.LUAD患者血清中的LINC01426在有无淋巴结转移以及患者TNM分期情况中有差异性表达,P<0.05,淋巴结发生转移的、TNM分期晚的LUAD患者血清中LINC01426的相对表达量高于没淋巴结发生转移、分期早的;而LUAD患者血清中的LINC01426的相对表达情况与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤的分化程度以及患者是否吸烟、是否有远处转移的情况中没有差异表达,P>0.05。
4.LUAD患者血清中LINC01426的ROC曲线分析结果显示:AUC为0.689(95%CI:0.529~0.850),P<0.05,当取约登指数最大临界值0.464时,其特异度和敏感度分别是0.824和0.640,认为LINC01426在LUAD的临床诊断中具有参考意义。
研究结论:
1.LINC01426在LUAD患者的血清中高表达;
2.淋巴结发生转移以及TNM分期较晚的LUAD患者血清中的LINC01426相比没有发生淋巴结转移的患者以及分期较早的患者具有高表达的特征。
3.血清中LINC01426在LUAD的临床诊断中具有参考意义。