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目的
非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)是一种恶性程度极高的肿瘤，它严重危害着人类健康，对生命有着极高威胁，它的发病率以及死亡率在最近数年内一直处于各大肿瘤的顶端。虽然人们在不断的改善NSCLC的早期诊断方法，今年来已经取得了较为明显的进展，但是仍因诊断方法或多或少的存在些不足，导致了近40％的NSCLC患者在被诊断时已经发展为晚期或转移性肿瘤，因而无法得到有效的治疗。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作为一种非编码转录物，在人类基因组中是一种重要的组成部分。已有研究证明在多数肿瘤中，lncRNA可通过不同方式影响肿瘤的多种生理病理过程，包括癌细胞的凋亡、增殖、侵袭与迁移等等。鉴于lncRNA的低表达水平和组织特异性，人们对lncRNA的功能研究仍然不够深入。外泌体中含有多种功能性分子，其通过对此些功能性分子进行传递来参与细胞间的通讯，还拥有保护其内容物稳定性功能，在检测RNA、蛋白质等过程中可使结果更加准确，外泌体广泛的存在于体液当中，在肿瘤早期检查中具有着广阔的应用前景，为此，本课题旨在探讨外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLC发展侵袭转移中的表达及功能。
方法
本实验首先对lncRNAOGFRP1的相对表达水平与NSCLC的发展与预后是否呈相关性进行初步研究。应用试剂盒沉淀法对初步诊断为NSCLC的患者以及正常健康对照者的血清，分别进行外泌体的提取，随后通过电镜观察和免疫印迹试验对所提取的囊性小泡进行鉴定，在证明成功提取外泌体后，对其进一步进行总RNA提取并检测其浓度纯度后通过逆转录生成cDNA，再通过荧光定量PCR技术检测提取的血清外泌体中lncRNAOGFRP1的相对表达水平。在成功得出NSCLC组以及健康对照组lncRNAOGFRP1的相对表达水平后，利用绘制ROC曲线研究外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLCL诊断中的敏感性、特异性和准确性，并利用统计学分析lncRNAOGFRP1的相对表达水平与NSCLC临床特征的相互影响关系。随后，我们研究了调控lncRNAOGFRP1的表达对NSCLC细胞功能的影响，首先建立NSCLC相关细胞系，利用筛选出的靶向干扰RNA来敲低目的基因表达，并用序列随机的siRNA作为阴性对照，在NSCLC细胞系A549、H1299这两个细胞系中分别利用干扰RNA内源性下调OGFRP1的表达水平。在成功将OGFRP1下调后，以CCK8实验来检测下调OGFRP1后肿瘤细胞的增殖能力，并观察表达下调后对细胞形态学的影响，然后通过划痕实验和Transwell实验，分别对OGFRP1表达下调后肿瘤细胞的转移侵袭能力进行检测，再利用免疫印迹实验分别对其细胞皮间充质转化与凋亡相关蛋白的表达进行检测。
结果
在初步收集的初诊为NSCLC的患者中，选用在经过病理学证实后确诊为NSCLC的患者血清进行后续实验。荧光定量PCR技术显示在NSCLC组和健康对照组的血清中外泌体lncRNAOGFRP1均有表达，但NSCLC组中的表达水平相较于健康对照组有着明显的升高。在病理诊断为金标准的前提下，通过ROC曲线分析发现在NSCLC的早期诊断中，外泌体lncRNAOGFRP1的诊断灵敏性、特异性和准确性分别为90.5％、86.9％和93.9％，显著高于癌胚抗原(CEA)，差异有统计学意义(P＜0.001)。血清外泌体lncRNAOGFRP1的相对表达量与NSCLC患者的淋巴结转移(P=0.034)以及T分期(P=0.03)的差异有统计学意义。lncRNAOGFRP1表达的下调抑制了NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并诱导了NSCLC的凋亡，在敲低lncRNAOGFRP1的表达后，肿瘤细胞的上皮间充质转化过程受到了抑制，从而抑制了NSCLC的进展。
结论
外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLC患者的血清中相对表达水平异常升高，且其相对表达水平在NSCLC肿瘤的分期、淋巴转移的关系中的差异具有统计学意义，提示其在NSCLC的进展中发挥了重要的作用，并具有预测患者预后的潜在价值。在NSCLC的诊断中外泌体lncRNAOGFRP1具有着较高的诊断效能，作为NSCLC的早期诊断生物学标志物有着巨大潜力。lncRNAOGFRP1的下调可通过抑制NSCLC细胞的上皮间充质转化过程对NSCLC细胞的增殖等能力都起到抑制作用，并对肿瘤细胞的凋亡过程起到促进作用，从而抑制了肿瘤的发展，是潜在的靶向治疗分子靶点。
非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)是一种恶性程度极高的肿瘤，它严重危害着人类健康，对生命有着极高威胁，它的发病率以及死亡率在最近数年内一直处于各大肿瘤的顶端。虽然人们在不断的改善NSCLC的早期诊断方法，今年来已经取得了较为明显的进展，但是仍因诊断方法或多或少的存在些不足，导致了近40％的NSCLC患者在被诊断时已经发展为晚期或转移性肿瘤，因而无法得到有效的治疗。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作为一种非编码转录物，在人类基因组中是一种重要的组成部分。已有研究证明在多数肿瘤中，lncRNA可通过不同方式影响肿瘤的多种生理病理过程，包括癌细胞的凋亡、增殖、侵袭与迁移等等。鉴于lncRNA的低表达水平和组织特异性，人们对lncRNA的功能研究仍然不够深入。外泌体中含有多种功能性分子，其通过对此些功能性分子进行传递来参与细胞间的通讯，还拥有保护其内容物稳定性功能，在检测RNA、蛋白质等过程中可使结果更加准确，外泌体广泛的存在于体液当中，在肿瘤早期检查中具有着广阔的应用前景，为此，本课题旨在探讨外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLC发展侵袭转移中的表达及功能。
方法
本实验首先对lncRNAOGFRP1的相对表达水平与NSCLC的发展与预后是否呈相关性进行初步研究。应用试剂盒沉淀法对初步诊断为NSCLC的患者以及正常健康对照者的血清，分别进行外泌体的提取，随后通过电镜观察和免疫印迹试验对所提取的囊性小泡进行鉴定，在证明成功提取外泌体后，对其进一步进行总RNA提取并检测其浓度纯度后通过逆转录生成cDNA，再通过荧光定量PCR技术检测提取的血清外泌体中lncRNAOGFRP1的相对表达水平。在成功得出NSCLC组以及健康对照组lncRNAOGFRP1的相对表达水平后，利用绘制ROC曲线研究外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLCL诊断中的敏感性、特异性和准确性，并利用统计学分析lncRNAOGFRP1的相对表达水平与NSCLC临床特征的相互影响关系。随后，我们研究了调控lncRNAOGFRP1的表达对NSCLC细胞功能的影响，首先建立NSCLC相关细胞系，利用筛选出的靶向干扰RNA来敲低目的基因表达，并用序列随机的siRNA作为阴性对照，在NSCLC细胞系A549、H1299这两个细胞系中分别利用干扰RNA内源性下调OGFRP1的表达水平。在成功将OGFRP1下调后，以CCK8实验来检测下调OGFRP1后肿瘤细胞的增殖能力，并观察表达下调后对细胞形态学的影响，然后通过划痕实验和Transwell实验，分别对OGFRP1表达下调后肿瘤细胞的转移侵袭能力进行检测，再利用免疫印迹实验分别对其细胞皮间充质转化与凋亡相关蛋白的表达进行检测。
结果
在初步收集的初诊为NSCLC的患者中，选用在经过病理学证实后确诊为NSCLC的患者血清进行后续实验。荧光定量PCR技术显示在NSCLC组和健康对照组的血清中外泌体lncRNAOGFRP1均有表达，但NSCLC组中的表达水平相较于健康对照组有着明显的升高。在病理诊断为金标准的前提下，通过ROC曲线分析发现在NSCLC的早期诊断中，外泌体lncRNAOGFRP1的诊断灵敏性、特异性和准确性分别为90.5％、86.9％和93.9％，显著高于癌胚抗原(CEA)，差异有统计学意义(P＜0.001)。血清外泌体lncRNAOGFRP1的相对表达量与NSCLC患者的淋巴结转移(P=0.034)以及T分期(P=0.03)的差异有统计学意义。lncRNAOGFRP1表达的下调抑制了NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并诱导了NSCLC的凋亡，在敲低lncRNAOGFRP1的表达后，肿瘤细胞的上皮间充质转化过程受到了抑制，从而抑制了NSCLC的进展。
结论
外泌体lncRNAOGFRP1在NSCLC患者的血清中相对表达水平异常升高，且其相对表达水平在NSCLC肿瘤的分期、淋巴转移的关系中的差异具有统计学意义，提示其在NSCLC的进展中发挥了重要的作用，并具有预测患者预后的潜在价值。在NSCLC的诊断中外泌体lncRNAOGFRP1具有着较高的诊断效能，作为NSCLC的早期诊断生物学标志物有着巨大潜力。lncRNAOGFRP1的下调可通过抑制NSCLC细胞的上皮间充质转化过程对NSCLC细胞的增殖等能力都起到抑制作用，并对肿瘤细胞的凋亡过程起到促进作用，从而抑制了肿瘤的发展，是潜在的靶向治疗分子靶点。