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[目的]甲基苯丙胺(Methamphetamine,METH)滥用会对全身多个系统造成不可逆损伤,免疫系统在机体免疫应答等方面具有重要作用,尽管许多研究已经描述了甲基苯丙胺暴露与免疫抑制的关系,但其潜在的作用机制仍不清楚。本研究为了揭示METH对多种免疫细胞的影响及其作用机制,为METH导致免疫细胞损伤的机制提供新的治疗靶点和理论基础。[方法]首先,探索METH作用于Jurkat细胞、THP-1细胞和NK-92细胞的不同浓度和时间进行CCK8细胞毒性检测;其次,用不同浓度的METH处理对这三种细胞进行流式细胞术检测细胞凋亡情况;针对不同浓度的METH处理48 h的Jurkat细胞和THP-1细胞并提取蛋白,用Western blot技术选取凋亡表达蛋白Cleaved caspase 3、Caspase 3、Cleaved PARP 和 BAX 进行验证。最后,分别用METH 浓度为 250 μM、100μM 和 100 μM 处理 Jurkat 细胞、THP-1 细胞和 NK-92 细胞 24 h,提取 RNA 做转录组测序并对 mRNA 表达谱进行分析,通过生信分析筛选不同组间的差异表达基因,针对差异表达基因进行富集分析和功能注释,对富集的通路差异表达基因进行qPCR验证。[结果]1.CCK8 实验发现,用浓度为 100 μM、250 μM、500 μM、1000 μM 和2000 μM的 METH 处理 Jurkat 细胞、THP-1 细胞和 NK-92 细胞后 12 h、24 h、48 h和72 h后,与正常对照相比,不同浓度的METH对这三种免疫细胞的毒性作用有统计学意义,且随着METH剂量增加,METH对Jurkat细胞和THP-1细胞的毒性作用可观察到明显的剂量效应关系。2.通过 0 μM、250μM、500 μM 和 1000 μM 的 METH 处理的 Jurkat 细胞、THP-1细胞和NK-92细胞12 h、24 h和48 h进行流式细胞术检测。Jurkat细胞在48 h 1000 μM的METH处理相对于control组凋亡率较高;THP-1细胞在不同浓度不同时间点的凋亡率差异无统计学意义;NK-92细胞在METH处理的不同时间段都可以检测到凋亡。3.通过 0 μM、250 μM、500 μM 和 1000 μM 的 METH 处理 Jurkat 细胞 48 h,凋亡相关蛋白 Western blot 检测 Cleaved caspase 3、Cleaved PARP 和 BAX 表达升高,Caspase 3 表达降低。通过 0 μM、250 μM、500μM和1000 μM 的 METH处理THP-1细胞没有检测到Cleaved caspase 3的表达,Caspase 3的表达没有明显改变。4.从CCK8的结果,我们选择毒性作用小于IC50(Half maximal inhibitory concentration,IC50)的浓度 250 μM、100 μM 和 100 μM 干预 Jurkat 细胞、THP-1细胞和NK-92细胞24 h;METH浓度为250 μM干预Jurkat细胞24 h后,对比control组mRNA功能主要富集在胆固醇代谢相关通路;METH浓度为100μM干预THP-1细胞24 h后,对比control组mRNA功能部分富集在钙离子代谢相关通路;METH浓度为100μM干预NK-92细胞24 h后,对比control组mRNA功能主要富集在细胞粘附和趋化作用相关的通路。5.qPCR验证METH浓度为250 μM干预Jurkat细胞对比control组24 h后的胆固醇代谢相关差异基因MVD、HMGCS1、FADS2和LSS的mRNA表达差异有统计学意义;qPCR验证METH浓度为100μM干预THP-1细胞对比control组24 h后钙离子代谢相关的差异基因PLD1表达很高;qPCR验证METH浓度为100 μM干预NK-92细胞对比control组24 h后,CCL1和FCER1G mRNA升高。[结论]1.METH对Jurkat细胞、THP-1细胞和NK-92细胞具有明显的毒性作用,且毒性作用随着浓度升高毒性作用增强。2.相对于METH引起的THP-1细胞的减少,METH诱导Jurkat细胞和NK-92细胞细胞凋亡导致细胞减少。3.在用METH 250 μM处理24 h的Jurkat细胞,主要引起胆固醇代谢通路异常,进而导致Jurkat细胞的细胞免疫功能降低。4.在用METH 100 μM处理24 h的THP-1细胞,主要发现THP-1细胞的钙离子代谢过程出现异常,进而THP-1细胞的粘附吞噬功能降低。5.在用METH 100 μM处理24 h的NK-92细胞,主要是NK-92细胞的细胞迁徙、粘附功能改变,NK-92细胞的杀伤作用降低使免疫系统的功能下降。