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目的:研究青龙衣-补骨脂药对（Qinglongyi-Buguzhi,QB）对H2O2诱导B16F10黑色素细胞氧化应激损伤的保护作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响机制,为QB治疗白癜风提供理论基础与科学依据。方法:不同浓度的H2O2（0、50、100、200、400、600μmol/L）处理B16F10黑色素细胞至不同时间（2h、4h、6h、8h）,MTT法检测H2O2的毒性范围,筛选出合适的H2O2作用浓度和作用时间,建立B16F10黑色素细胞氧化应激损伤模型。用0、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64mg/m L的青龙衣、补骨脂、QB（1:1、1:2、2:1）分别处理B16F10黑色素细胞24h,MTT法检测细胞活性,分别筛选出合适的药物浓度进行后续实验。将细胞分为17组,分别为对照组、H2O2组、青龙衣（低、中、高浓度）组、补骨脂（低、中、高浓度）组、QB（1:1、1:2、2:1的低、中、高浓度）组,不同药物分别预处理B16F10黑色素细胞24h,再用合适浓度的H2O2干预细胞至合适时间,MTT法检测不同药物处理对氧化应激损伤细胞活性的影响,流式细胞术测定细胞ROS含量,检测细胞SOD和CAT活性,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞黑色素含量,综合筛选出效果最佳的药物组别进行后续机制研究。筛选出效果最佳的药物组别后,将细胞进一步分为6组:对照组、H2O2组、QB组、LY294002组、QB+LY294002组、阳性对照VE组,应用流式细胞术检测细胞内ROS含量及细胞凋亡情况,免疫荧光法检测Nrf2的入核情况,RT-PCR技术检测Akt、Nrf2和HO-1基因的表达情况,Western blot技术检测Akt、p-Akt、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达情况。结果:1.H2O2诱导B16F10黑色素细胞氧化应激损伤模型的建立:随着H2O2作用浓度和作用时间的增加,B16F10黑色素细胞的活力逐渐下降。与对照组的细胞活性相比,H2O2浓度为200μmol/L,干预时间为4h时,细胞存活率为58.98±2.69%（P＜0.01）,接近B16F10黑色素细胞的IC50。因此选择H2O2作用浓度200μmol/L,作用时间4h,建立B16F10黑色素细胞氧化应激损伤模型。2.青龙衣、补骨脂、QB（1:1、1:2、2:1）对H2O2诱导的B16F10黑色素细胞氧化应激损伤的影响:青龙衣、补骨脂、QB（1:1、1:2、2:1）作用浓度为0.02mg/m L、0.04mg/m L及0.08mg/m L时,对细胞活性没有明显影响,选择此浓度进行实验。与对照组相比,H2O2组B16F10细胞活性显著降低（P＜0.01）,细胞ROS含量明显升高（P＜0.01）,细胞SOD活性、细胞CAT活性及细胞内黑色素含量明显下降（P＜0.01）,细胞具有明显损伤。经不同浓度（0.02、0.04、0.08mg/m L）青龙衣、补骨脂、QB（1:1、1:2、2:1）预处理后,与H2O2组相比,药物组B16F10细胞活性明显升高（P＜0.01）,细胞ROS含量显著降低（P＜0.01）,细胞SOD活性、细胞CAT活性及细胞内黑色素含量均明显增加（P＜0.05）,细胞损伤减少,其中以QB（1:2）（0.08mg/m L）药物组效果最为显著。因此选择QB（1:2）（0.08mg/m L）进行后续相关机制研究。3.QB（1:2）通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路抗H2O2诱导的B16F10黑色素细胞氧化应激损伤机制:在对照组、H2O2组、QB组、LY组（PI3K抑制剂LY294002预处理2h）、QB+LY组（QB预处理前用加入PI3K抑制剂LY294002处理2h）及阳性对照VE组中,H2O2组细胞凋亡率和细胞ROS含量最高。与H2O2组相比,QB组细胞凋亡率和细胞ROS含量显著降低（P＜0.01）。与QB组相比,LY组细胞凋亡率和细胞ROS含量明显增加（P＜0.05）。与LY组相比,QB+LY组细胞ROS含量明显降低（P＜0.05）,细胞凋亡率有所降低,但差异无统计学意义（P＞0.05）。Western blot结果显示,与对照组相比,H2O2组中细胞p-Akt、核Nrf2及HO-1蛋白表达水平明显增加（P＜0.01或P＜0.05）。与H2O2组相比,QB组能显著增加细胞p-Akt、核Nrf2及HO-1蛋白的表达（P＜0.01或P＜0.05）。加入PI3K抑制剂LY294002后,细胞p-Akt、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达被明显抑制（P＜0.01或P＜0.05）。与LY组相比,QB+LY组细胞p-Akt、HO-1蛋白的表达明显增加（P＜0.01或P＜0.05）,但表达水平低于药物组。所有组别中Akt蛋白表达水平无显著差异（P＞0.05）。RT-PCR结果与Western blot结果较为一致。免疫荧光结果显示,与对照组相比,H2O2组细胞Nrf2入核明显增加（P＜0.05）。与H2O2组相比,QB组细胞Nrf2入核显著增加（P＜0.01）。与QB组相比,LY组细胞Nrf2入核显著降低（P＜0.01）。与LY组相比,QB+LY组细胞Nrf2入核明显增加（P＜0.05）。提示QB可能是通过激活PI3K/Akt/Nrf2信号通路发挥抗H2O2诱导的B16F10黑色素细胞氧化应激损伤的作用。结论:QB可以增加H2O2诱导氧化应激损伤B16F10黑色素细胞的存活率,降低细胞ROS含量,增加细胞抗氧化酶SOD及CAT的活性,同时促进细胞内黑色素的产生。QB对H2O2诱导氧化应激损伤B16F10黑色素细胞具有保护作用,而这种保护作用可以被PI3K抑制剂LY294002所阻断。表明QB对氧化损伤B16F10黑色素细胞的保护作用可能是通过激活PI3K/Akt/Nrf2信号通路而实现。