【摘 要】
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目的:黄芪-当归药对（芪归药对）在经典组方用药中,以李东垣之当归补血汤为代表,主治血虚发热证,然现代研究也已表明,其不同配伍比例功效有所差异,亦可表现为益气活血作用。本课题通过进一步研究芪归药对对气虚血瘀大鼠的益气活血作用,建立一定的质量控制标准并探讨其体外成分及体内吸收入血成分,以期为相关研究及临床合理用药提供科学依据。方法:使用HPLC-DAD建立黄芪-当归（36g,3∶1）指纹图谱;选用SP
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目的:黄芪-当归药对（芪归药对）在经典组方用药中,以李东垣之当归补血汤为代表,主治血虚发热证,然现代研究也已表明,其不同配伍比例功效有所差异,亦可表现为益气活血作用。本课题通过进一步研究芪归药对对气虚血瘀大鼠的益气活血作用,建立一定的质量控制标准并探讨其体外成分及体内吸收入血成分,以期为相关研究及临床合理用药提供科学依据。方法:使用HPLC-DAD建立黄芪-当归（36g,3∶1）指纹图谱;选用SPF级成年雄性Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、3∶1组及对照药（5∶1）组,每日通过控制食量及凉水游泳制备气虚血瘀模型,同时各组每天给药（水）1次,给药组剂量10.2 g·kg-1,模型组和空白组给予等量的蒸馏水,连续15天。观察大鼠一般状况;记录各组大鼠体质量,全血及血浆黏度,胸腺指数和脾脏指数,血清中ATP、ADP、vWF水平及ATP/ADP值;HE及扫描电镜观察血管内皮形态;采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS分析水煎液成分及血清中的原型及代谢成分。结果:1.建立了芪归药对（36g,3∶1）指纹图谱,标定出吸收信号强、响应值大、稳定性好的共有峰14个。通过与单味药进行比对并对色谱峰进行归属,发现来源于黄芪的成分有8个,当归4个,同时来源于黄芪和当归有2个。2.气虚血瘀组大鼠与空白组相比,体质量明显降低（P＜0.01）;自主活动、逃避及攻击行为减少,饮水量减少,毛发易脱落无光泽,舌偏紫暗,粪便部分不成型,尾部发凉色淡并伴有青紫色瘀斑;全血（高切、中切、低切）黏度及血浆黏度均明显升高（P＜0.01,P＜0.05）;胸腺指数和脾脏指数均明显下降（P＜0.01,P＜0.05）;血清ATP含量显著降低（P＜0.01）,ADP含量显著升高（P＜0.01）,ATP/ADP值显著降低（P＜0.01）,vWF含量显著升高（P＜0.01）;HE及扫描电镜结果显示,气虚血瘀组大鼠与空白组比较血管部分受损,表现为内膜结构紊乱,内皮凸起、缺损、粗糙,细胞粘附迁移明显。经给药干预后,与模型组相比,3∶1及5∶1组均可改善大鼠的一般状态,体质量亦明显增加（P＜0.01）;全血及血浆黏度结果显示:给药组均能降低大鼠全血（高切、中切、低切）黏度及血浆黏度,其中3∶1组可明显降低全血低切黏度（P＜0.05）;胸腺指数及脾脏指数结果显示:给药组均能升高胸腺指数及脾脏指数,其中5∶1组能明显升高大鼠胸腺指数（P＜0.05）;血清ATP、ADP水平结果显示:给药组均能升高ATP含量,降低ADP含量,升高ATP/ADP值,其中5∶1组对ATP、ADP水平作用更明显（P＜0.05）,两组均能显著升高ATP/ADP值（P＜0.01）;血清vWF水平结果显示:给药组均能降低vWF水平,其中3∶1组vWF含量降低更明显（P＜0.05）;HE及扫描电镜结果显示:给药组对血管内皮损伤均有不同程度的改善,内膜结构较整齐。3.利用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS共鉴定出体外化学成分48个,主要包括黄酮类、皂苷类、苯酞类、有机酸、糖类和氨基酸及其衍生物;进一步对体内入血成分进行分析,共初步鉴定了11种原型成分吸收入血,包括4种黄酮类成分,4种苯酞类,1种皂苷类,1种有机酸,1种氨基酸;代谢产物7种,主要为黄酮及其苷类成分的代谢产物。结论:1.芪归药对3∶1和5∶1组对气虚血瘀模型大鼠宏观及微观检验指标均有改善作用,综合来看,3∶1组益气活血作用更加明显。2.本实验为芪归药对（36g,3∶1）质量控制提供了参考方法,同时结合体外成分与体内入血成分研究,分析出包括芒柄花苷、芒柄花素、阿魏酸、黄芪甲苷等11种原型成分吸收入血,并鉴定出7种代谢产物。其中毛蕊异黄酮及毛蕊异黄酮葡萄糖苷虽未检测到原型成分,但有相应的代谢产物,推测以上成分可能是芪归药对发挥益气活血作用的物质基础。
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