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背景再灌注治疗是临床最为常用的治疗缺血性心脏病的方法,但再灌注治疗则会引起心肌缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R),I/R是心血管疾病中常见的病理生理现象,急性心肌梗死后缺血的心肌在冠状动脉再通术后导致心肌组织的进一步损伤,缺血的心肌恢复血液供应后,心肌细胞在形态、功能、代谢、电生理学表现等方面发生一系列的损伤表现,从而引起的严重并发症,是术后致死的主要原因。I/R损伤会影响心肌正常的舒缩功能并影响疾病的预后情况。I/R损伤是世界范围内心脏衰竭的主要原因。这种损伤会激活细胞凋亡和自噬,最终导致细胞死亡。故通过有效的干预手段来减轻或预防I/R损伤是目前临床上的比较热门的课题。目前,国内外研究发现,CD47基因被敲除的小鼠,或者通过抗CD47单克隆抗体阻断TSP-1-CD47信号传导通路,组织再生能力加强,可以减少对心脏、肾脏、肝脏以及组织皮瓣的损伤,增加缺血组织的存活。目的本研究采用原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,模拟心肌缺血/再灌注模型,通过抗氧化应激及抗凋亡等机制探讨封闭CD47对体外培养心肌细胞低氧/复氧损伤的作用及其机制,旨在为其临床应用提供基础理论依据。方法利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血/再灌注模型。实验分为正常对照组(Control)、模型组(H/R)、处理组(CD47+H/R)。采用MTT 比色法检测心肌细胞活力;使用试剂盒测定培养的心肌细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量;使用Annexin-V与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;DHE(dihydroethidium)染色检测心肌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Western blot 检测心肌细胞 CD47,eNOS 和 p-eNOS 的表达。结果心肌细胞低氧/复氧处理明显增加了细胞凋亡,相对于对照组,I/R组心肌细胞的凋亡率明显升高(P<0.01);与H/R组相比,CD47抗体可显著降低心肌细胞凋亡率(P<0.01)。与Control组相比较,H/R组LDH,CK,MDA和ROS水平显著升高(P<0.01),SOD和NO含量水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,CD47+H/R组SOD和NO水平显著提高(P<0.01),LDH,CK,MDA以及ROS水平显著降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组相比较,模型组CD47表达显著升高(P<0.01),p-eNOS表达显著降低(P<0.01);相对于模型组,CD47+H/R组CD47表达明显降低(P<0.01),p-eNOS表达明显升高(P
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