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在全球范围内,肝癌是导致癌症相关死亡的第四大常见原因,在发病率方面排名第六。根据世界卫生组织的年度预测,估计2030年将有100多万患者死于肝癌。在我国,肝癌目前为第四位的常见恶性肿瘤及肿瘤致死病因中的第三位。HCC的早期症状并不明显,晚期HCC常见临床表现为上腹痛、消瘦、乏力、黄疸、腹水等症状。目前肝细胞癌的致病原因和明确的发病机理尚未完全了解。现认为HCC的发病机制是一个复杂的多因素、多步骤的过程,受其环境和基因的影响。虽然HCC的肿瘤发生在所有年龄组,但在儿童中相对少见。中国HCC患者大多在45-65岁之间。目前有临床研究发现,近年来年轻人的HCC发病率显著增加。HCC在男性中发病率高于女性,男女比例约为3:1。手术为主结合介入、射频、靶向、免疫、中药等综合方法在治疗HCC的临床实践中已得到广泛应用,尽管如此,晚期HCC患者的治愈率仍然很低。目前,肝癌切除术后患者1年生存率大于80%,5年生存率大于60%,70%的患者在术后5年发生肿瘤复发,HCC患者的预后也与其临床和病理分型相关。因此,为提高晚期HCC患者的治愈率,应开发早期检测、早期诊断和早期治疗HCC的生物标志物,同时进一步研究肝癌的发病机制,为靶向药物的研发奠定一定的基础。以往的研究表明,microRNA(miRNA)通过影响靶基因的表达,在人类癌症的发病机制中发挥重要作用。许多作为癌基因和肿瘤抑制因子的miRNA被发现参与了 HCC的发生。例如,miR-199通过下调HCC中G-蛋白信号通路17的调控因子,发挥了抑制miRNA的功能。例如,miR-219-5p通过调控Cadherin 1促进HCC肿瘤生长和细胞转移。近年来,MicroRNA-361-5p(miR-361-5p)被发现在一些人类癌症中发挥不同的作用。有学者提miR-361-5p通过介导上皮-间质转化(EMT)促进宫颈癌的发生。相比之下,miR-361-5p对前列腺癌有抑制作用。也的研究提示miR-361-5p通过调节PI3K/AKT/mTOR通路抑制胃癌的化疗耐药。然而,miR-361-5p在HCC中的具体作用目前尚不清楚,因此,本研究旨在探讨其在HCC中的作用。Wilms’s tumor-1(WT1)已被发现对高级别浆液性卵巢癌具有诊断和预后作用。有研究表明,WT1在人乳腺癌中也有异常表达,WT1在硬纤维瘤中表达上调。也有学者报道WT1高表达与卵巢癌侵袭性临床特征相关。然而,WT1在肝细胞癌中的影响还没有被研究。目前WNT/β-catenin通路已被证实能调节肝细胞癌的发展。例如,miR-324-3p在肝癌被发现通过激活WNT/β-catenin通路来发挥致癌效应。也有学者提出,miR-337通过调节PI3K/AKT和WNT/β-catenin信号通路抑制肝癌进展。然而,miR-361-5p和WT1或WNT/β-catenin信号通路在肝细胞癌中的相互影响还没有被研究。本研究主要探讨miR-361-5p在HCC中的潜在功能和在HCC中的下调机制。miR-361-5p和WT1或WNT/β-catenin信号通路在肝细胞癌中的相互影响也在本研究中得到证实。目的:MicroRNA-361-5p(miR-361-5p)参与多种人类癌症的发病机制。然而,miR-361-5p在肝细胞癌(HCC)中的具体作用仍不清楚。因此,本研究旨在阐明miR-361-5p在HCC中的作用。方法:1、采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-361-5p和Wilms’s tumor-1(WT1)的表达水平。2、通过细胞计数Kit-8(CCK-8)和Transwell检测miR-361-5p的功能。3、采用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测蛋白表达。4、通过异种移植瘤形成实验观察肝癌的生长情况。5、通过双荧光素酶实验验证miR-361-5p与WT1的关系。结果:1、在HCC中miR-361-5p表达下调,预示HCC患者预后较差。2、我们发现miR-361-5p通过负激活WT1抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-361-5p也抑制肝癌的肿瘤生长。3、miR-361-5p在肝细胞癌中通过抑制EMT和负激活WNT/β-catenin通路抑制肿瘤进展。结论:miR-361-5p通过靶向WT1和调控WNT/β-catenin通路抑制肝癌的进展。