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目的:基于肿瘤细胞来源的EVs对肺成纤维细胞Integrinβ1/TGF-β信号通路的调控,探讨保元解毒汤抑制细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）重塑改善转移前微环境（pre-metastatic niche,PMN）的作用机制。方法:1.尾静脉注射EVs和皮下共注射4T1细胞构建Balb/c雌性小鼠自发性乳腺癌的肺转移前微环境模型。根据体重将Balb/c雌性小鼠随机分为Normal组、4T1组、EVs组、保元解毒汤高剂量组（BYJD-H）、保元解毒汤中剂量组（BYJD-M）、保元解毒汤低剂量组（BYJD-L）、阳性对照组（PTX）,每组10只。小动物活体成像观察4T1细胞肺转移情况,HE染色观察肺组织结构变化,免疫组化检测肺组织中角蛋白、S100A4的表达。WB检测肺PMN中ECM重塑相关基质蛋白Periostin的表达、免疫荧光检测肺PMN中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）的表达,观察保元解毒汤对肺PMN中ECM的影响。2.ELISA检测肺单细胞悬液及小鼠血清EVs中Integrinβ1的表达,免疫组化检测肺组织中肺成纤维细胞（lung fibroblasts,LF）活化标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达,观察保元解毒汤对肿瘤来源的EVs-Integrinβ1及肺PMN中LF活化的影响。3.ELISA检测肺单细胞悬液中转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）的表达。q RT-PCR检测TGF-β信号通路关键分子TGF-βRI、TGF-βRII、Smad2、Smad3、Smad4基因的表达,WB检测TGF-β信号通路关键分子TGF-βRI、TGF-βRII、Smad2、Smad3、Smad4、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达,观察保元解毒汤对肺转移前微环境TGF-β信号通路相关分子表达的影响。结果:1.小动物活体成像、HE染色结果及角蛋白免疫组化结果显示肿瘤细胞未向肺部转移;小鼠肺组织中可见PKH67标记的肿瘤来源的EVs。末次体重结果显示,与Normal组相比,EVs组、4T1组、PTX组与BYJD-H、BYJD-M、BYJD-L组小鼠体重均明显下降（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）;与EVs组、4T1组相比,PTX组小鼠体重明显下降（P＜0.01）;与PTX组相比,保元解毒汤各组小鼠体重下降较轻（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。小鼠瘤重、瘤体积结果显示,与EVs组相比,PTX组小鼠瘤重、瘤体积明显下降（P＜0.01,P＜0.01）,保元解毒汤各组小鼠瘤重、瘤体积无明显下降。WB结果显示,与Normal组相比,4T1组、EVs组和PTX组小鼠肺组织中的Periostin表达升高（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05）。与4T1组相比,BYJD-M、BYJD-H组小鼠肺组织中的Periostin表达明显降低（P＜0.01,P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-L、BYJD-M、BYJD-H组小鼠肺组织中的Periostin表达降低（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05）。与PTX组相比,BYJD-H、BYJDM组小鼠肺组织中的Periostin表达明显降低（P＜0.01,P＜0.01）。免疫荧光结果显示,与Normal组相比,4T1组、EVs组、PTX组、BYJD-L组小鼠肺组织中的FN表达明显升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与4T1组相比,EVs组小鼠肺组织中的FN表达升高（P＜0.05）,BYJD-H组小鼠肺组织中的FN表达明显降低（P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-L、BYJD-M、BYJD-H组小鼠肺组织中的FN表达明显降低（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与PTX组相比,BYJD-H、BYJD-M组小鼠肺组织中的FN表达明显降低（P＜0.01,P＜0.01）。免疫组化结果显示,与Normal组相比,4T1组、EVs组、PTX组和BYJD-L、BYJD-H组小鼠肺组织中的S100A4表达升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05）。与4T1组相比,BYJDM组小鼠肺组织中的S100A4表达降低（P＜0.05）。与EVs组相比,BYJD-H、BYJDM组小鼠肺组织中的S100A4表达降低（P＜0.05,P＜0.01）。2.ELISA结果显示,与Normal组相比,EVs组、PTX组和BYJD-L、BYJDM、BYJD-H组小鼠血清EVs中的Integrinβ1含量升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05）。与4T1组相比,EVs组、PTX组、BYJD-L组小鼠血清EVs中的Integrinβ1含量明显升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-H、BYJD-M组小鼠血清EVs中的Integrinβ1含量明显降低（P＜0.01,P＜0.01）。与PTX组相比,BYJD-H组小鼠血清EVs中的Integrinβ1明显下降（P＜0.01）。与Normal组相比,4T1组、EVs组、PTX组和BYJD-L、BYJD-M组小鼠肺组织中的Integrinβ1含量升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-L、BYJD-M、BYJD-H组和PTX组小鼠肺组织中的Integrinβ1含量明显降低（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与PTX组相比,BYJD-H、BYJD-L组小鼠肺组织中的Integrinβ1含量降低（P＜0.01,P＜0.05）。免疫组化结果显示,与Normal组相比,4T1组、EVs组、PTX组和BYJDL、BYJD-M组小鼠肺组织中的α-SMA表达明显升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-H组小鼠肺组织中的α-SMA表达降低（P＜0.05）。Pearson相关性分析表明,各组小鼠外周血中EVs-Integrinβ1表达与FN表达呈正相关（r=0.682,P＜0.01）,表明保元解毒汤可能通过调控肿瘤细胞来源的EVs-Integrinβ1抑制肺成纤维细胞活化,进而影响ECM重塑,抑制肺PMN形成。3.ELISA结果显示,与Normal组相比,4T1组、EVs组、PTX组、BYJD-L组小鼠肺单细胞悬液中的TGF-β含量明显升高（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与4T1组相比,PTX组和BYJD-H、BYJD-M组小鼠肺单细胞悬液中的TGF-β含量升高（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01）。与EVs组相比,BYJD-H、BYJD-M、BYJD-L组和PTX组小鼠肺单细胞悬液中的TGF-β含量明显降低（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01）。与PTX组相比,BYJD-H、BYJD-M组小鼠肺单细胞悬液中的TGF-β含量明显降低（P＜0.01,P＜0.01）。q RT-PCR和WB结果显示,与Normal组相比,EVs组小鼠肺中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、Smad2/3蛋白和m RNA表达升高。与EVs组相比,BYJD-H组小鼠肺组织中TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3、Smad4蛋白和m RNA表达降低,Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达降低。BYJDM组TGF-βRⅠ、Smad3、Smad4、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达降低,TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad4 m RNA表达降低,BYJD-L组小鼠肺组织中Smad3、Smad4蛋白表达降低。PTX组小鼠肺组织中TGF-βRⅠ、Smad2、Smad4、TGF-βRⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达降低,Smad3 m RNA表达降低。结论:保元解毒汤可能通过调控EVs介导的Integrinβ1/TGF-β通路抑制肺成纤维细胞活化和ECM重塑,从而影响肺转移前微环境的形成。