目的:通过体外实验观察蠲痹补肾方含药血清对破骨细胞分化前后的作用及机制，以及对Acp5及CtskmRNA表达的影响，为临床应用提供实验依据。　　 方法:①建破骨细胞培育模型，将破骨细胞前体Raw264.7细胞以2×104个/孔的密度接种到已提前放置无菌盖玻片的24孔板中，每孔加入含10％FBS的无酚红a-MEM培养液0.75ml和15ngRANKL，隔天换液。在培养第4天后，破骨细胞即诱导生成。②用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色试剂对破骨细胞进行染色，倒置显微镜下观察并对破骨细胞进行鉴定，凡细胞核数目≥3个，细胞核及细胞质被TRAP试剂染成酒红色者即为破骨细胞。③破骨细胞骨陷窝:将Raw264.7细胞以2×104个/孔的密度接种到已提前放置象牙骨片的24孔板中，每孔加入含10％FBS的无酚红a-MEM培养液0.75ml和15ngRANKL，隔天换液，第4天开始用无RANKL的10％FBS的a-MEM培养液培养，培养7天后，1％的甲苯胺蓝染液染色观察，观察骨陷窝情况。④大鼠血清制备，大鼠分蠲痹补肾方组和正常血清组两组，蠲痹补肾方组按照临床等效剂量换算公式，根据人的使用剂量换算为大鼠的等效剂量，该方水煎2次，煎液过滤，混合后加热浓缩至含生药量0.93g/ml，4℃保存备用，每只大鼠每天4ml，分两次灌胃，两次间隔2小时，连灌3天，于末次给药后1小时取血制备血清。正常血清组以灭菌用水替代蠲痹补肾方水煎剂作为对照组。⑤大鼠含药血清组和正常血清组各设5个血清浓度，分别为5％、10％、20％、30％、40％。在破骨细胞诱导过程中添加入细胞培养液中，4天后染色观察对破骨细胞分化过程的影响，RT-PCR检测各组血清对破骨细胞标志酶基因TRAP(Acp5)及cathepsinK(Ctsk)的表达影响。⑥大鼠含药血清组和正常血清组各设2个血清浓度，分别为5％、20％。添加入成熟破骨细胞细胞培养液中，7天后PCR检测各组血清对破骨细胞酶基因Acp5及Ctsk的表达影响，象牙骨片甲苯胺蓝染色观察各组骨陷窝情况。　　 结果:①Raw264.7细胞经RANKL诱导4天，破骨细胞数目达到高峰。经TRAP染色后，对照组Raw264.7细胞被染成深褐色，而诱导组破骨细胞细胞质和细胞核呈酒红色。正常象牙骨片呈城墙样，表面平整。与破骨细胞共培养7天后的象牙骨片经甲苯胺蓝染色后，可见大片虫蚀样蓝染的骨陷窝形成。②5％含药血清组即可抑制破骨细胞生成，20％含药血清组视野中RAW264.7细胞数目开始减少，30％及40％含药血清组细胞密度逐渐降低。而正常血清组各组之间细胞密度未见明显差异。与正常血清组比较，含药血清作用于破骨细胞分化过程时，能抑制破骨细胞Acp5、CtskmRNA表达(P＜0.05)。③与破骨细胞共培养7天后的象牙骨片经甲苯胺蓝染色后，20％正常血清组象牙骨片可见小片面积虫蚀样蓝染的骨陷窝，而20％含药血清组象牙骨片未见虫蚀样蓝染的骨陷窝。与正常血清组比较，含药血清作用于破骨细胞24h后，能显著抑制其Acp5mRNA表达(P＜0.05)。　　 结论:蠲痹补肾方能明显抑制破骨细胞分化及骨侵蚀能力。这可能是通过抑制破骨细胞Acp5及CtskmRNA表达而发挥作用。