【摘 要】
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目的:(1)在HSV-1感染BV2细胞建立的单纯疱疹病毒性脑炎模型中,观察TLR2信号通路各分子及下游炎性因子的变化,进一步明确TLR2通路在其发病过程中的作用;(2)研究在正常BV2细胞、单纯
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目的:(1)在HSV-1感染BV2细胞建立的单纯疱疹病毒性脑炎模型中,观察TLR2信号通路各分子及下游炎性因子的变化,进一步明确TLR2通路在其发病过程中的作用;(2)研究在正常BV2细胞、单纯疱疹病毒性脑炎模型中,柯里拉京对TLR2信号通路、下游炎性因子的干预作用,探索柯里拉京发挥抗炎作用的机制。 方法:(1)培养BV2细胞系、Vero细胞系,用Vero细胞扩增HSV-1,提取HSV-1,10稀释病毒共8个滴度梯度,对BV2细胞进行滴定,记录细胞形态变化,采用Reed-Muench法计算出病毒TCID50滴度,以100TCID滴度HSV-1感染BV2细胞系建立单纯疱疹病毒性脑炎模型,模型组、正常对照组分别用ElISA方法检测炎症因子TNF-α、IL-6的表达量,用 RT-PCR方法检测 TLR2及下游信号通路中TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO mRNA相对表达水平,用流式细胞术检测细胞表面TLR2的表达水平,用Western-blot方法检测TIRAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白相对表达水平。(2)配制柯里拉京溶液,2倍稀释8个浓度梯度对BV2细胞进行干预,用MTT方法检测细胞活性以观察柯里拉京的细胞毒性。用柯里拉京分别干预正常BV2细胞、HSE模型细胞,用上述方法检测TLR2及下游各分子的变化。 结果:(1)HSV-1感染小胶质细胞BV2造模成功,单纯疱疹病毒性脑炎模型组相对于对照组TLR2信号通路下游炎性因子TNF-α、IL-6分泌明显增多,TLR2及下游信号通路中TRIAP、MyD88、IRF5、P38、NEMO的mRNA表达量升高,细胞表面 TLR2增多,TRIAP、MyD88、P38、PP38、NEMO蛋白表达水平增高;差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)柯里拉京干预正常BV2细胞后,信号通路各分子TLR2、TIRAP、MyD88、IRF-5、P38、NEMO的mRNA表达量下降(P<0.05),炎性因子IL-6分、TNF-α分泌量及细胞表面TLR2受体表达量无明显变化(P﹥0.05)。柯里拉京干预HSE模型后,信号通路各分子TLR2、MyD88、IRF-5、P38、NEMO的mRNA表达量、炎性因子IL-6及TNF-α分泌量、细胞表面TLR2受体表达量均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:(1)TLR2信号通路在单纯疱疹病毒性脑炎发病过程中中介导强烈免疫反应;(2)柯里拉京可能通过抑制TLR2信号通路的活性而减轻单纯疱疹病毒性脑炎模型中的炎症反应。
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