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目的:探究自噬(Autophagy)在烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)感染的角膜炎中固有免疫阶段的作用。方法:1、取正常和真菌性角膜炎感染的人角膜组织,电镜(TEM)观察其自噬体的变化情况。2、烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,采用Western blot法检测小鼠正常角膜、损伤对照组角膜和感染后12小时、1天、3天角膜中自噬相关蛋白B型微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-II,LC3B-II)、p62(sequestosome 1,SQSTM1)、溶酶体相关膜蛋白1(Lysosomal Associated Membrane Protein 1,LAMP-1)和Beclin-1的表达,并电镜检测正常及感染后3天角膜中自噬体的变化情况。3、分别给予小鼠角膜自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)、氯喹(Chloroquine,CQ)及自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin)处理,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,观察小鼠角膜临床表现和病理变化情况;采用Western blot法检测小鼠正常及3-MA、CQ和rapamycin处理后角膜中自噬相关蛋白LC3B-II、p62、LAMP-1和Beclin-1的表达;采用PCR法检测各组小鼠角膜中CXCL-1 mRNA表达变化情况,采用免疫荧光法检测角膜中性粒细胞的数量变化,并电镜观察正常、3-MA、CQ和rapamycin处理角膜后中性粒细胞的形态变化;采用PCR法和Western blot法检测各组小鼠角膜中IL-1β、HMGB-1、IL-18、TNF-α、IL-10 mRNA和蛋白的表达。结果:1、与正常角膜相比,真菌性角膜炎患者的角膜组织中明显观察到自噬体的积累。2、烟曲霉菌建立小鼠真菌性角膜炎动物模型后,与小鼠损伤对照组相比,自噬相关蛋白LC3B、LAMP-1和Beclin-1在烟曲霉菌感染小鼠角膜12小时、1天、3天后表达明显升高,p62蛋白在12小时、1天、3天表达逐渐降低。与小鼠正常角膜相比,真菌性角膜炎的角膜中明显观察到自噬体的积累。3、3-MA、CQ和rapamycin处理小鼠角膜建立小鼠真菌性角膜炎动物模型后,与DMSO感染对照组相比,3-MA处理的小鼠角膜炎症反应加重,临床评分升高,病理变化程度加重;与PBS感染对照组相比,CQ处理的小鼠角膜临床评分升高,病理变化加重;而rapamycin处理的小鼠角膜较vehicle感染对照组炎症反应减轻,临床评分降低,病理变化程度减轻。4、与DMSO感染对照组相比,3-MA处理小鼠角膜后,自噬相关蛋白LC3B-II、LAMP-1和Beclin-1表达降低,而p62表达升高;与PBS对照组相比,CQ处理的小鼠角膜中LC3B-II、LAMP-1、Beclin-1和p62表达升高;与vehicle感染对照组相比,rapamycin处理的角膜LC3B-II、LAMP-1、Beclin-1表达升高,而p62表达降低。5、与感染对照组相比,3-MA和CQ处理的小鼠角膜中,CXCL-1 mRNA水平表达升高,中性粒细胞数量增加,中性粒细胞的核常染色质增加,细胞颗粒数减少;rapamycin处理角膜后,CXCL-1 mRNA水平表达降低,中性粒细胞数量减少,中性粒细胞结构无明显变化。6、与感染对照组相比,3-MA和CQ处理的小鼠角膜中促炎细胞因子IL-1β、HMGB-1、IL-18和TNF-αmRNA和蛋白的表达升高,抑炎因子IL-10 mRNA和蛋白的表达降低;rapamycin处理小鼠角膜后,IL-1β、HMGB-1、IL-18和TNF-αmRNA和蛋白的表达降低,而IL-10 mRNA和蛋白的表达升高。结论:烟曲霉菌感染后,角膜中自噬的发生明显增多,提示自噬参与真菌性角膜炎炎症反应过程。抑制自噬可以减轻角膜炎症反应程度,减少角膜组织中性粒细胞浸润,降低炎症细胞因子表达,而诱导自噬的发生可以减轻烟曲霉菌角膜炎的严重程度,提示自噬在烟曲霉菌引起的真菌性角膜炎固有免疫阶段中发挥抑炎作用。