论文部分内容阅读
目的: 肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌是其最主要的一种病理类型。然而目前诊断非小细胞肺癌的手段非常有限，面临着敏感性不高、特异性低、患者依从性差等诸多问题，寻找一种快速无侵入性、高敏感性、高特异性的肿瘤标志物是肿瘤诊疗的重中之重。长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNAs）作为近两年研究的热点分子，有越来越多的研究证实其在肿瘤的发生发展中起到了关键作用。本研究目的在于验证血清游离lncRNAs是否具有作为非小细胞肺癌诊断及预后预测的新型肿瘤标志物潜在临床应用价值。 方法: 1.首先，在PubMed数据库以关键词“非小细胞肺癌”、“lncRNAs”检索相关的文献，获取非小细胞肺癌相关的差异表达lncRNAs，作为候选lncRNAs。 2.筛选阶段，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术，检测非小细胞肺癌组织及相对应的癌旁正常组织中候选lncRNAs的表达量，经统计分析筛选出在非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织中具有显著表达差异的lncRNAs，并进一步在血清样本中进行验证，筛选出血清中差异表达显著的lncRNAs。在血清Training组样本（140例非小细胞肺癌患者及120例健康对照者）中验证上一步差异表达的lncRNAs。同时对这260例患者和健康对照者的非小细胞肺癌相关蛋白类肿瘤标志物如CEA（癌胚抗原）、CYFRA21-1（角蛋白19）、SCCA（鳞状细胞癌抗原）的表达量进行检测，并对lncRNAs及各肿瘤标志物的诊断效能进行分析。将差异表达有统计学意义的lncRNAs联合CEA、CYFRA21-1和SCCA代入logistic多元回归方程，建立血清lncRNAs非小细胞肺癌诊断模型用以区分非小细胞肺癌和健康对照，并分析其诊断效能。 3.验证阶段，纳入另外独立的一个研究队列，包括100例非小细胞肺癌患者及100例健康对照者。对上述筛选出的差异表达lncRNAs及建立的诊断模型进一步验证血清表达水平和对非小细胞肺癌的诊断效能。 4.随访验证阶段的100名非小细胞肺癌患者，分析差异表达的lncRNAs与非小细胞肺癌患者总体生存率的关系。用Kaplan-Meier分析和Cox比例风险回归模型分别绘制生存曲线以及进行不良预后独立风险因素的分析。 结果: 1.通过搜索PubMed数据库，我们选择了14个lncRNAs作为候选分子。 2.在筛选阶段，14个候选lncRNAs分子中有12个lncRNAs分子在非小细胞肺癌组织和相应癌旁组织之间呈差异表达(p＜0.05)。血清样本中有2个lncRNAs（SOX2OT和ANRIL）分子在非小细胞肺癌患者和健康对照组之间呈差异表达。训练集血清SOX2OT和ANRIL表达量在非小细胞肺癌血清中呈上升趋势(均p＜0.01)。训练集血清SOX2OT、ANRIL、CEA、CYFRA21-1和SCCA的受试者工作曲线下面积(AUC)分别为0.745、0.723、0.631、0.620和0.612。由上述5个分子联合建立的血清lncRNA非小细胞肺癌诊断模型的AUC为0.853(95％CI=0.804-0.894，灵敏度=77.1％，特异度=79.2％)。 3.在验证阶段，SOX2OT和ANRIL在非小细胞肺癌和健康对照者血清样本之间呈差异表达（均p＜0.01）。血清lncRNAs非小细胞肺癌诊断模型的AUC为0.883(95％ CI=0.830-0.924，灵敏度=91.0％，特异度=70.0％)。该模型对TNM分期的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期非小细胞肺癌的诊断效能分别为0.862、0.875和0.917。 4.经Kaplan-Meier分析发现，SOX2OT或ANRIL表达水平低的非小细胞肺癌患者的总体生存率显著高于SOX2OT或ANRIL表达水平高的非小细胞肺癌患者的总体生存率（p分别为0.008，0.017）。经多因素Cox比例风险回归分析发现，SOX2OT(p=0.036)和临床病理分期（TNM）(p=0.023)是非小细胞肺癌患者的预后风险因素的独立预测指标。 结论: 1.血清lncRNAs非小细胞肺癌诊断模型对于诊断非小细胞肺癌具有潜在应用价值，对于早期诊断非小细胞肺癌具有重要意义。 2.血清中的SOX2OT可以作为非小细胞肺癌患者的预后独立预测指标。