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黄曲霉毒素B1(AFB1)是由真菌的部分产毒菌株产生的次级代谢产物,广泛存在于各类食品中,因其毒性极高,具有“三致”作用,对人和动物造成潜在巨大危害,国际标准、国家标准都对其制定了严格的限量。因此,建立快速、灵敏的检测方法对于进一步加强黄曲霉毒素B1的监测具有重要意义。免疫分析法具有灵敏、简便、快速等特点,在食品安全监测中具有优势。本研究建立了黄曲霉毒素B1的酶联免疫方法(AFB1-ELISA)和时间分辨荧光免疫方法(AFB1-TRFIA)两种免疫检测方法,主要研究内容如下:(1)基于所制备抗体,本研究通过对ELISA的各种条件进行优化,成功建立针对AFB1的ELISA快速检测方法并开发出AFB1-ELISA试剂盒,该方法IC50=1.07μg/L,检测范围为0.15-4.05μg/L(IC20-IC80),LOD=0.05μg/L,其检测范围线性回归方程为y =-17.49x +109.03(R2 = 0.9945),批间和批内差异分别为6.96%和4.88%,稳定性好,针对各种样品的回收率在80%-110%之间。试剂盒在37℃烘箱中7天后,各浓度点的平均计数为4℃同时保存试剂的90%左右,剂量曲线与4℃保存的试剂结果相类似,试剂盒在4℃下保质期为12个月。(2)TRFIA具有比ELISA更高的灵敏度,本论文以镧系元素铕为信号放大物,进行TRFIA检测方法的研究,成功开发出AFB1-TRFIA试剂盒。方法灵敏度为0.04μg/L,间效应点均值IC20、IC50和IC80分别为0.14、0.63、3.04μg/L,与AFB2、AFG1、AFG2的交叉反应率分别为0.7%、0.5%和2.3%,实际样品的回收试验回收率均达到90%以上,AFB1-TRFIA试剂盒的热稳定性试验表明:试剂盒在37℃烘箱中7天后,各浓度点的平均计数为4℃同时保存试剂的95%左右,试剂盒有效期为12个月。(3)试验通过对多种样品的前处理条件进行优化研究,结果表明样品基质对ELISA和TRFIA检测有一定的影响,并且不同的样品要使用不同的提取方法才能达到最好的结果。试验证明:粉状样品要经过超声提取10 min,液态样品要经过震荡提取20 min,提取过程中,温度对检测的影响不明显,含油量高的样品要用石油醚除脂,这样就可以基本消除基质产生的影响。基于上述优化条件,试验成功建立了能满足实际试剂盒检测要求的样品前处理方法。