裂叶荨麻(Urtica.fissa E.Pritz)是荨麻科荨麻属的多年生草本植物,全草入药,具有祛风除湿、活血止痛的功效,荨麻属植物在全世界分布广泛,品种多样,资源丰富。在如今糖尿病发病率越来越高的趋势下,中药以其资源丰富、毒副作用小等优势被学者们广泛应用于降糖药物的开发研究中。研究表明,裂叶荨麻的粗提物具有降血糖功效,但是发挥降血糖作用的活性部位及化学成分尚不明确。本课题以α-葡萄糖苷酶的抑制活性检测作为追踪手段,并结合抗氧化活性、分子对接技术,拟寻找出裂叶荨麻中发挥降糖活性的部位及化学成分。一、采用α-葡萄糖苷酶活性检测方法对裂叶荨麻植株的根、茎、叶进行了筛选,其 IC50值分别为 11.809 mg/mL、12.402mg/mL、20.169 mg/mL,确定出裂叶荨麻根对α-葡萄糖苷酶抑制活性较高。取一定量裂叶荨麻根粗粉,以70%乙醇常温下浸提3次,每次48h,合并浸提液,减压浓缩得粗提物浸膏。将粗提物浸膏在热水中悬浮后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,减压浓缩回收溶剂,得到石油醚相萃取物7.7%、乙酸乙酯相萃取物5.2%、正丁醇相萃取物48.9%和水相萃取物29.3%。四相萃取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性检测发现,石油醚相对α-葡萄糖苷酶几乎没有活性,其余三相的强弱顺序为乙酸乙酯相(IC50=8.499mg/mL)>正 丁醇相(IC50=13.241mg/mL)>水相(IC50=19.774mg/mL)。四相萃取物总黄酮含量为乙酸乙酯相(70.62mg/g)>正丁醇相(45.48mg/g)>水相(18.76mg/g)>石油醚相(10.23mg/g);在抗氧化活性检测中,四相萃取物对DPPH自由基清除率强弱顺序为乙酸乙酯相(IC50=40.361μg/mL)>正丁醇相(IC50=268.710μg/mL)>水相(IC50=788.757μg/mL)>石油醚相(IC50=5539.13μg/mL);四相萃取物对羟基自由基清除率强弱顺序为乙酸乙酯相(IC50=3.313mg/mL)>正丁醇相(IC50=4.559mg/mL)>水相(IC50=15.782mg/mL)>石油醚相(IC50=22.862mg/mL);四相萃取物的总还原力测定中,随着萃取物浓度的增加,石油醚相的总还原能力基本不变,其余三相总还原力强弱顺序为乙酸乙酯相>正丁醇相>水相,得出四相萃取物的抗氧化能力强弱与总黄酮含量的高低趋势一致。由此可知,裂叶荨麻醇提物中发挥降糖作用最强的部位是乙酸乙迶相,其次是正丁醇相。二、采用硅胶柱色谱法对乙酸乙酯相进行分离,并用重结晶进一步分离纯化,得到15个单体有机化合物;对正丁醇相进行粗分得到1个无机化合物。利用NMR、ESI-HR-MS、IR等技术,并结合已知文献数据对这些化合物进行结构鉴定,化合物分别为20,23-二烯三十四酸(1)、β-谷甾醇(2)、对羟基桂皮酸甲酯(3)、十六烷酸(4)、对甲氧基苯甲醛(5)、槲皮素(6)、山柰苷(7)、邻苯二甲基二丁酯(8)、大黄素(9)、反式-对羟基肉桂酸(10)、丁二酸(11)、胡萝卜苷(12)、东莨菪素(13)、腺苷(14)、尿苷(15)和硝酸钾(16),其中第3、4、7、9、10号化合物是首次从裂叶荨麻中分离得到,1和5号化合物是首次从荨麻属植物中分离得到。三、以α-葡萄糖苷酶作为受体蛋白,乙酸乙酯相分离得到的15个单体化合物作为配体分子,利用分子对接技术计算15个配体分子与受体蛋白之间的相互作用能量,筛选出有12个单体化合物与α-葡萄糖苷酶结合活性良好;再以阿卡波糖(IC50=4.254mg/mL)作为阳性对照,对这12个单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性检测,得出对α-葡萄糖苷酶抑制活性较强的化合物是胡萝卜苷(IC50=1.693mg/mL)、山柰苷(IC50=1.725mg/mL)和 20,23-二烯三十四酸(IC50=2.940mg/mL),最终确定胡萝卜苷、山柰苷和20,23-二烯三十四酸可能是裂叶荨麻发挥降糖活性的物质基础。