【摘 要】
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克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)是污染玉米发酵制品的食源性致病菌之一,其在多种不利环境胁迫下均具有较强的生存能力,给玉米发酵制品的食品安全造成了一定的危害。因此需要对玉米发酵制品中克罗诺杆菌的分型情况及耐受性进行系统且深入的研究。基于此,本试验对玉米发酵制品中克罗诺杆菌污染情况、分型及耐受性进行了研究。本试验以22株分离自玉米发酵制品中的克罗诺杆菌为研究对象,通过基质辅助激光解吸电离
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克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)是污染玉米发酵制品的食源性致病菌之一,其在多种不利环境胁迫下均具有较强的生存能力,给玉米发酵制品的食品安全造成了一定的危害。因此需要对玉米发酵制品中克罗诺杆菌的分型情况及耐受性进行系统且深入的研究。基于此,本试验对玉米发酵制品中克罗诺杆菌污染情况、分型及耐受性进行了研究。本试验以22株分离自玉米发酵制品中的克罗诺杆菌为研究对象,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行菌株鉴定及聚类分析,揭示玉米发酵制品中克罗诺杆菌的污染情况。再从分子分型和表型分型的角度对22株分离株进行多位点序列分型(MLST),血清型分型和omp A基因分型,明确不同菌株间的系统发育关系。进一步研究分离株的耐酸性,耐渗透性,在4℃和-20℃下的抗寒性,耐药性,测定其生物膜形成能力,评估玉米发酵制品中克罗诺杆菌在一些环境压力下的生存能力。研究结果表明:216份玉米发酵制品中克罗诺杆菌的检出率为8.80%(19/216)。其中,玉米发酵面条中克罗诺杆菌污染情况较为严重。22株克罗诺杆菌被分为20株阪崎克罗诺杆菌和2株穆斯汀克罗诺杆菌,因此确定阪崎克罗诺杆菌为玉米发酵制品中克罗诺杆菌的优势菌种。在分型研究中,MLST将22株克罗诺杆菌分为8个序列型(ST),其中,ST8(45.45%)和ST770(27.27%)为玉米发酵制品中的优势ST,有7个等位基因和5个ST首次被发现,说明玉米发酵制品中的克罗诺杆菌具有丰富的遗传多样性。血清型分型将22株克罗诺杆菌分为4个血清型,分别为阪崎克罗诺杆菌O1、O2、O7血清型和穆斯汀克罗诺杆菌Mu O1血清型。其中,阪崎克罗诺杆菌血清型O2(81.81%)为玉米发酵制品中克罗诺杆菌的优势血清型。omp A基因分型将22株克罗诺杆菌分为4个omp A基因型,分别为omp A5、omp A6、omp A97和omp A84。其中,omp A5和omp A6为玉米发酵制品中克罗诺杆菌的优势omp A型。玉米发酵制品中的克罗诺杆菌都具有一定的耐酸性,当p H值降低到3.5时,22株分离株才全部失去活性。其中CS18在不同的p H条件下都表现出较强的耐酸性。22株克罗诺杆菌都具有一定的耐渗透能力,其中CS8、CS20、CS21耐渗透性较差,CS11、CS18耐渗透性较强。22株克罗诺杆菌在4℃和-20℃时都具有一定的抗寒性,其中CS18在两种冷处理温度下都表现出较强的耐寒性,而CS22在两种冷处理温度下菌落量显著下降,耐寒性最差。22株克罗诺杆菌均具有形成生物膜的能力,不同菌株间生物膜形成能力有所差异,其中CS2、CS9、CS17、CS18的生物膜形成能力较强。22株克罗诺杆菌主要对头孢噻吩具有耐药性,耐药率为77.3%。耐受性研究结果表明,玉米发酵制品中的克罗诺杆菌对酸、渗透压、低温、抗生素等环境胁迫都具有耐受性,而且还具有生物膜形成能力。其中,CS18更是在多种不利应激下都具有较强的耐受性,这值得引起人们对玉米发酵制品食品安全的重视。综上所述,本研究较为全面的揭示了玉米发酵制品中克罗诺杆菌的污染及分型情况,并对其在多种环境胁迫下的生存能力做出评估。为后续控制和解决玉米发酵制品中克罗诺杆菌污染问题,建立有效的消杀控制手段提供理论依据,具有重要的意义。
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