【摘 要】
：
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是革兰氏阴性条件致病菌,能够引起多种危及生命的急性或慢性感染,也是导致囊性纤维化（Cystic fibrosis,CF）患者病情进一步恶化的主要原因。P.aeruginosa多样的毒力因子和固有的抗生素耐药性给治疗由这种细菌引起的感染带来了巨大的挑战。P.aeruginosa能利用磷脂酰胆碱（PC）降解产生的甘油作为其在CF患者肺部环境生
论文部分内容阅读
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是革兰氏阴性条件致病菌,能够引起多种危及生命的急性或慢性感染,也是导致囊性纤维化（Cystic fibrosis,CF）患者病情进一步恶化的主要原因。P.aeruginosa多样的毒力因子和固有的抗生素耐药性给治疗由这种细菌引起的感染带来了巨大的挑战。P.aeruginosa能利用磷脂酰胆碱（PC）降解产生的甘油作为其在CF患者肺部环境生长的能源物质,甘油代谢在P.aeruginosa适应CF患者肺部环境方面可能具有重要作用。甘油-3-磷酸（G3P）是甘油的磷酸化产物,可经脱氢反应产生二羟基丙酮磷酸（DHAP）进入中心代谢途径,同时也是细胞膜和贮存脂质合成的关键前体。磷酸化代谢物的过量积累通常是有毒的,已有文献报道G3P过量积累对部分原核生物和真核生物中的生长及生理表型产生负面影响。近年越来越多的研究表明,生理代谢同样与细菌对抗生素的敏感性以及毒力因子的产生密切相关,在细菌代谢途径中寻找药物靶点开发窄谱抗生素,已成为耐药菌防治领域新的研究热点。本论文针对P.aeruginosa中G3P的代谢机制及其毒性作用展开研究,希望可以为开发靶向G3P代谢的窄谱抗生素防治P.aeruginosa导致的感染提供理论基础与数据支持。本论文第二章以P.aeruginosa模式菌株PAO1为研究对象,构建了该菌株中甘油代谢相关基因的突变菌株,揭示了P.aeruginosa中G3P的合成、分解与转运机制。确定P.aeruginosa PAO1中G3P可来源于甘油的磷酸化与DHAP的还原,分别依赖于甘油激酶GlpK和NAD（P）+依赖性G3P脱氢酶GpsA;G3P的分解通过FAD依赖性G3P脱氢酶GlpD催化的G3P脱氢反应进行;胞外G3P可经转运蛋白GlpT转运进入P.aeruginosa PAO1胞内。另外,发现转录调控蛋白GlpR以G3P而非甘油为效应物,通过与glpFK、glpD启动子区域的结合调控P.aeruginosa PAO1中甘油与G3P代谢相关基因的表达。本论文第三章对P.aeruginosa PAO1的各甘油代谢相关基因的突变菌株进行生理表型分析,发现glpD敲除菌株在丰富培养基中的表型发生显著改变。CF患者呼吸道为一富含甘油的环境,进一步研究发现P.aeruginosa PAO1可在优势碳源琥珀酸或葡萄糖存在时共利用甘油,且glpD敲除菌株在琥珀酸/葡萄糖+甘油培养基中存在G3P的胞内胞外积累,生长受到严重抑制,G3P积累导致glpD敲除菌株的绿脓菌素降低,蹭动性和泳动性减弱,对卡那霉素和氧化压力的耐受性降低等,GlpD可能具有作为抗P.aeruginosa感染治疗靶标的潜力。本论文第四章通过序列比对在P.aeruginosa PAO1基因组鉴定出3个假定的G3P磷酸酶:PA0562、PA3172和PA2067,发现过表达PA0562和PA3172有助于缓解G3P积累对P.aeruginosa PAO1生长的抑制,两者的敲除则会强化G3P积累对P.aeruginosa PAO1生长的抑制。对PA0562和PA3172进行外源表达、分离纯化和酶学性质分析,确定 PA0562 和 PA3172 对 G3P 的Km分别是 7.114±1.305 mM、5.634±0.208 mM,Vmax分别是 47.410±4.102 U·mg-1、18.060±0.305 U·mg-1。PA0562 和 PA3172 并非以 G3P 为唯一底物,对葡萄糖-6-磷酸、核糖-5-磷酸、果糖-6-磷酸等磷酸化代谢物同样具有催化活性。综上所述,本论文揭示了P.aeruginosa模式菌株PAO1中G3P的代谢及调控机制,发现G3P异常积累会抑制P.aeruginosa PAO1生长,导致其毒力因子产生减少及对抗生素和氧化压力的耐受性下降;进一步鉴定了两个可以G3P为底物的磷酸酶,证明其在缓解G3P压力中发挥一定的作用。研究结果对于揭示微生物中G3P代谢机制,提出P.aeruginosa导致感染的防治策略具有一定的指导意义。
其他文献
21世纪是一个科技和创新引领的知识经济时代,市场需求不断变化,产品生命周期普遍缩减。在国家实施“创新驱动”战略,推动“供给侧结构”改革的环境条件下,企业作为市场发展的主力军,其研发能力的强弱成为影响国家战略转型的关键因素,也是影响企业自身创新能力、竞争能力、未来成长能力和价值创造能力提升的关键因素。尤其对于以发现新思路、研发新产品为成长源泉的高新技术企业而言,研发投入对公司发展的影响更为显著。在此
在目前竞争越来越激烈的建筑行业市场中,施工企业想要保障自身的生存与发展,就必须积极提升企业的管理水平,其中最有效的措施就是对成本进行管理,以最低的成本争取获得利益最大化。在工程项目中,对施工阶段的成本进行控制是实现成本节约的有效途径,因此在该阶段加强成本管理,应用合适、有效、先进的方法将事半功倍。在本篇论文中,作者结合自身的工作实践,通过查阅大量的文献资料,对国内外关于成本管理的发展以及以往挣值法
木质纤维素是自然界中含量丰富,来源广泛的可再生资源,木糖是木质纤维素水解液中主要成分之一,开发以木糖为底物的高值化学品生产工艺具有重要意义。1,2,4-丁三醇和3,4-二羟基丁酸是重要的平台化合物,在军事、制药、化工等领域具有重要用途。目前,化学合成法生产1,2,4-丁三醇和3,4-二羟基丁酸存在收率低、成本高、污染环境等问题,而生物法合成1,2,4-丁三醇和3,4-二羟基丁酸具有反应条件温和、环
随着社会经济的发展,百姓生活水平的不断提高,糖尿病已然成为危害人类健康的“杀手”,糖尿病的发生严重降低了患者的生活质量,同时也加重了患者的经济负担。2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是最常见的糖尿病类型,约占糖尿病患病总人数的90%。T2DM的主要特点是高血糖、高胰岛素血症与胰岛素抵抗,其中胰岛素抵抗被认为是推动T2DM发生发展的主要原因。蛋白酪氨酸磷酸酶1B
药物在人体肝脏内能够被不同亚型的细胞色素P450酶代谢产生多种药物代谢产物,这些酶促反应产物往往会改变母体药物的活性、稳定性、水溶性以及生物利用度,甚至导致不可预测的副作用或毒性。针对药物代谢产物进行严格的药理学、毒理学、药效学和药代动力学研究,已经成为现代药物开发过程中的必需环节。因此,药物代谢产物是药物研究中的重要化学标准品。然而,由于P450酶催化的氧化性反应具有高度的区域/立体选择性,利用
目的:探讨中西医结合方案治疗肝肾阴虚型重症IgA肾病患者的有效性及安全性。方法:24例肝肾阴虚型重症IgA肾病患者随机分为治疗组（中药和西药治疗）和对照组（中药模拟剂和西药治疗）,治疗后的每个月（即4周）检测24 h尿蛋白定量,观察中医证候指标,每2个月（即8周）空腹静脉采血,检测血常规、肝肾功能指标、血钾,进行疗效评价。结果:治疗8周、24周后,治疗组患者的24 h尿蛋白定量较治疗前相比,有显著
近年来,混合所有制改革逐渐成为国有企业改革工作的重点,混合所有制企业管理模式的梳理达到白热化阶段,而目前我国许多企业的管理模式仍停滞在改革前的状态,尤其是在薪酬管理方面,落后的管理方式一定程度上制约了混改企业的发展脚步,N企业也不例外,改革后,双重职级、薪酬不公平等现象在N企业内部长期存在。优化薪酬体系,统一职级标准成为N企业迎接挑战和快速发展的重要手段之一。本论文以混合所有制N企业为例,在分析了
在新一轮的电改政策推行5年后,云南省的电力市场交易程度已近60%。随着电力市场开放程度的增加,生产成本较高的火电企业在市场竞争中处于劣势地位,市场交易电量争取难度大,市场交易均价无法覆盖成本,火电厂持续发展面临严峻挑战。云南的清洁能源装机占比超过80%,为了环保,汛期安排水电满发,火电机组除了保安全的其他机组均停机检修;只有在枯期或枯汛交替期,调度将市场所需电量按火电装机容量、性能指标等比例分配给
癌症是威胁人类健康的第二大杀手,具有患者生存期短和生存质量差等特点,并且目前大部分类型的癌症缺乏可治愈的手段,这让人们谈癌色变,其中肺癌仍是导致患者死亡数最多的癌症。目前针对肺癌的药物多为靶向药,如吉非替尼等。但是由于对靶点功能认识的不完全和药物不良反应等缺点,靶向药的应用依然存在困难。因此,针对特异性靶点,开发活性更好、安全性更强的新型靶向药是目前抗肿瘤药物研发的重点。SHP2（SH2 doma
民航空中交通管理部门从2010年着手建立安全管理系统,该系统自建立之日起至今已经运行10年。但是伴随着民航事业的发展,民航安全形势日渐复杂,民航安全管理工作仍然需要不断的改善提升,以满足空中交通管理高质量发展的需要,才能实现中国建设民航强国的夙愿。本文对近年发生的由于空管原因造成的不安全事件进行成因分析,由此挖掘出当下民航空管系统安全管理存在的问题;并以Y空管分局为研究对象,对Y空管分局的安全管理